நேரடி RT-qPCR கிட்
விளக்கம்
நேரடி RT-qPCR கிட் தனித்தனியாக தொகுக்கப்பட்ட RT-qPCR இடையகத்தையும் அதிக திறன் கொண்ட நொதியையும் வழங்குகிறது.கலவை (Taq, M-MLV, RI), பின்-இறுதி கருவிகள் மற்றும் அமைப்பை உருவாக்குவதற்கு வசதியாக உள்ளதுசரிசெய்தல், எளிய சரிபார்ப்பிற்குள்.
விவரக்குறிப்புகள்
500T, 50,000T
கிட் கூறுகள்
கிட் உள்ளடக்கங்கள் (20 μL எதிர்வினை அமைப்பு) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 டி | 50,000 டி | |
நேரடி என்சைம் கலவை | 500 μL× 1 | 50 மி.லி× 1 |
2× நேரடி RT-qPCR இடையக | 1 மி.லி× 5 | 500 மி.லி× 1 |
அறிவுறுத்தல் | 1 | 1 |
செயல்பாட்டு படிகள்
மறுஉருவாக்கம் தயாரிப்பதற்கு முன், கிட்டில் உள்ள அனைத்து எதிர்வினைகளையும் அறை வெப்பநிலையில் கரைத்து மெதுவாக கலக்க வேண்டும்.
A: தயார் செய் of டெம்ப்ளேட் மற்றும் வினைப்பொருள்
1. தயாரிக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட்டை (ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட்டை பிரித்தெடுக்க மற்றும் சுத்திகரிக்க ஃபோர்ஜீன் டோட்டல் ஆர்என்ஏ ஐசோலேஷன் கிட் தொடர் கிட் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது) அல்லது மாதிரி கிராக்கிங் தயாரிப்பு (ஃபோர்ஜீன் லைசிஸ் சிஸ்டம் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது), குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள் (10 μM) மற்றும் பிற தொடர்புடைய நுகர்பொருட்கள், கருவி.
2. 2× நேரடி RT-qPCR பஃபர், RNase-Free ddH2O மற்றும் 20× ROX குறிப்பு சாயம் (அது இருந்தால்'கள் தேவை) ஐஸ் கொண்ட பெட்டியில், இவற்றை இயற்கையாக உருகச் செய்து, மெதுவாக கலக்கவும்.
B: தயார் செய் of RT-qPCR அமைப்பு
மேசை 1 : தயார் செய் of RT-qPCR sஅமைப்பு
கூறு | தொகுதி | இறுதி செறிவு |
2× நேரடி RT-qPCR இடையக | 10 μL | 1× |
நேரடி என்சைம் கலவை | 1μL | |
முன்னோக்கி ப்ரைமர் (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ரிவர்ஸ் ப்ரைமர்(10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ஆய்வு(4 μM) | 1μL | 200nM |
டெம்ப்ளேட்(ஆர்என்ஏ அல்லது லைசேட்) | X μL | |
20×ROX குறிப்பு சாயம் | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
மொத்த தொகுதி | 20μL |
C: அமைக்கவும் தி RT-qPCR எதிர்வினை திட்டம்
மேசை 2 : RT-qPCR எதிர்வினைon திட்டம் அமைத்தல் (க்கான உதாரணமாக: இரண்டு-படி முறை)
படி | வெப்ப நிலை | நேரம் | சுழற்சிகள் | உள்ளடக்கம் | |
1 | 50℃ | 15 நிமிடம் | 1* | 1 | தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் |
2 | 95℃ | 1 நிமிடம் | 1 | முன் குறைதல் | |
3 | 95℃ | 10 நொடி | 40-45 | டினாடரேஷன் | |
60℃ | 30 நொடி 2* | அனீல்/நீட்டிப்பு |
சேமிப்பு மற்றும் அடுக்கு வாழ்க்கை
கிட் -20 இல் சேமிக்கப்பட வேண்டும்± 5℃.செல்லுபடியாகும் காலம் 12 மாதங்கள்.
மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-கரை சுழற்சிகளைத் தவிர்க்கவும் (<5 சுழற்சிகள்).