Foreasy Taq DNA பாலிமரேஸ்
விளக்கம்
Foreasy Taq DNA பாலிமரேஸ் என்பது ஒரு புதிய Taq என்சைம் ஆகும், இது Escherichia coli இன்ஜினியரிங் பாக்டீரியாவில் மரபணு மறுசீரமைப்பு தொழில்நுட்பத்தால் வெளிப்படுத்தப்படுகிறது.நொதியே ஒரு குறிப்பிட்ட சூடான-தொடக்க செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது மற்றும் வழக்கமான PCR மற்றும் qPCR க்கு பயன்படுத்தப்படலாம்;இது 5'→3' டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் செயல்பாடு மற்றும் 5'→3' எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாடு உள்ளது, ஆனால் 3'→5' எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லை.
கிட் கூறுகள்
கூறு | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
Foreasy Taq DNA பாலிமரேஸ்(5 U/μL) | 5000 யூ (1 மிலி) | 50 KU (10 மிலி) | 500 KU (100 மிலி) |
2× Taq எதிர்வினை தாங்கல் | 25 மிலி × 5 | 250 மிலி × 5 | 500 மிலி × 25 |
அம்சங்கள் மற்றும் நன்மைகள்
- உயர் விவரக்குறிப்பு: நொதி ஒரு குறிப்பிட்ட சூடான-தொடக்க செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது.
- வேகமான பெருக்கம்: 10 நொடி/கேபி.
- மிகவும் தகவமைக்கக்கூடிய டெம்ப்ளேட்: GC உயர் மதிப்பு, பல்வேறு கடினமான-பெருக்க டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டை திறமையாகப் பெருக்கப் பயன்படுத்தலாம்.
- வலுவான நம்பகத்தன்மை: சாதாரண டாக் என்சைம் 6 முறை.
- வலுவான வெப்ப நிலைத்தன்மை: இது ஒரு வாரத்திற்கு 37 °C இல் வைக்கப்படலாம் மற்றும் 90% க்கும் அதிகமான செயல்பாட்டை பராமரிக்கும்
கிட் பயன்பாடு
பல்வேறு PCR/qPCR அமைப்புகள் மற்றும் நேரடி PCR அமைப்புகள்
டிஎன்ஏ துண்டுகளின் PCR பெருக்கம்
டிஎன்ஏ லேபிளிங்
டிஎன்ஏ வரிசைமுறை
பிசிஆர் ஏ-வால்
U வரையறை
1U: 74 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 30 நிமிடங்கள் டெம்ப்ளேட்/ப்ரைமராக செயல்படுத்தப்பட்ட சால்மன் விந்தணு டிஎன்ஏவைப் பயன்படுத்தி 10 என்மோல் டியோக்சிநியூக்ளியோடைடுகளை அமில-கரையாத பொருளில் இணைக்கத் தேவையான நொதியின் அளவு.
எதிர்வினை நிலை
வெப்ப நிலை | நேரம் | மிதிவண்டி |
37°C | 5 நிமிடங்கள் | 1 |
94°C | 5 நிமிடங்கள் | 1 |
94°C | 10 வினாடிகள் | 35 |
60°C | 10 வினாடிகள் | |
72°C | 20 நொடி/கி.பி | |
72°C | 2 நிமிடங்கள் | 1 |
சேமிப்பு
2 ஆண்டுகளுக்கு -20 ± 5 °C அல்லது நீண்ட கால சேமிப்பிற்கு -80 °C.
பெருக்க சமிக்ஞைகள் இல்லை
1.கிட்டில் உள்ள Taq DNA பாலிமரேஸ் முறையற்ற சேமிப்பு அல்லது கிட் காலாவதியானதால் அதன் செயல்பாட்டை இழக்கிறது.
பரிந்துரை: கிட் சேமிப்பு நிலைமைகளை உறுதிப்படுத்தவும்;PCR அமைப்பில் பொருத்தமான அளவு Taq DNA பாலிமரேஸை மீண்டும் சேர்க்கவும் அல்லது தொடர்புடைய சோதனைகளுக்கு புதிய நிகழ்நேர PCR கிட்டை வாங்கவும்.
2.DNA டெம்ப்ளேட்டில் Taq DNA பாலிமரேஸின் தடுப்பான்கள் நிறைய உள்ளன.
பரிந்துரை: டெம்ப்ளேட்டை மீண்டும் சுத்தப்படுத்தவும் அல்லது பயன்படுத்தப்படும் டெம்ப்ளேட்டின் அளவைக் குறைக்கவும்.
3.Mg2+ செறிவு பொருத்தமானது அல்ல.
பரிந்துரை: நாங்கள் வழங்கும் 2× உண்மையான PCR கலவையின் Mg2+ செறிவு 3.5mM ஆகும்.இருப்பினும், சில சிறப்பு ப்ரைமர்கள் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டுகளுக்கு, Mg2+ செறிவு அதிகமாக இருக்கலாம்.எனவே, Mg2+ செறிவை மேம்படுத்த நீங்கள் நேரடியாக MgCl2 ஐ சேர்க்கலாம்.தேர்வுமுறைக்கு ஒவ்வொரு முறையும் Mg2+ 0.5mM ஐ அதிகரிக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
4. PCR பெருக்க நிலைமைகள் பொருத்தமானவை அல்ல, மேலும் ப்ரைமர் வரிசை அல்லது செறிவு முறையற்றது.
பரிந்துரை: ப்ரைமர் வரிசையின் சரியான தன்மையை உறுதிப்படுத்தவும் மற்றும் ப்ரைமர் சிதைக்கப்படவில்லை;பெருக்க சமிக்ஞை நன்றாக இல்லை என்றால், அனீலிங் வெப்பநிலையைக் குறைத்து, ப்ரைமரின் செறிவை சரியான முறையில் சரிசெய்ய முயற்சிக்கவும்.
5.வார்ப்புருவின் அளவு மிகக் குறைவு அல்லது அதிகமாக உள்ளது.
பரிந்துரை: டெம்ப்ளேட் லைனியரைசேஷன் கிரேடியன்ட் டியூஷனைச் செய்து, நிகழ்நேர PCR பரிசோதனைக்கான சிறந்த PCR விளைவுடன் டெம்ப்ளேட் செறிவைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
NTC மிக அதிக ஒளிர்வு மதிப்பைக் கொண்டுள்ளது
1.செயல்பாட்டின் போது ஏற்படும் எதிர்வினை மாசுபாடு.
பரிந்துரை: ரியல் டைம் பிசிஆர் சோதனைகளுக்குப் புதிய ரியாஜெண்டுகளை மாற்றவும்.
2. PCR எதிர்வினை அமைப்பு தயாரிப்பின் போது மாசுபாடு ஏற்பட்டது.
பரிந்துரை: செயல்பாட்டின் போது தேவையான பாதுகாப்பு நடவடிக்கைகளை எடுக்கவும், அதாவது: லேடெக்ஸ் கையுறைகளை அணிவது, வடிகட்டியுடன் பைப்பெட் முனையைப் பயன்படுத்துதல் போன்றவை.
3. ப்ரைமர்கள் சிதைந்தன, மேலும் ப்ரைமர்களின் சிதைவு குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கத்தை ஏற்படுத்தும்.
பரிந்துரை: ப்ரைமர்கள் சிதைந்ததா என்பதைக் கண்டறிய SDS-PAGE எலக்ட்ரோபோரேசிஸைப் பயன்படுத்தவும், மேலும் நிகழ்நேர PCR சோதனைகளுக்கு அவற்றைப் புதிய ப்ரைமர்களுடன் மாற்றவும்.
ப்ரைமர் டைமர் அல்லது குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கம்
1.Mg2+ செறிவு பொருத்தமானது அல்ல.
பரிந்துரை: நாங்கள் வழங்கும் 2× Real PCR EasyTM கலவையின் Mg2+ செறிவு 3.5 mM ஆகும்.இருப்பினும், சில சிறப்பு ப்ரைமர்கள் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டுகளுக்கு, Mg2+ செறிவு அதிகமாக இருக்கலாம்.எனவே, Mg2+ செறிவை மேம்படுத்த நீங்கள் நேரடியாக MgCl2 ஐ சேர்க்கலாம்.தேர்வுமுறைக்கு ஒவ்வொரு முறையும் Mg2+ 0.5mM ஐ அதிகரிக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
2. PCR அனீலிங் வெப்பநிலை மிகவும் குறைவாக உள்ளது.
பரிந்துரை: ஒவ்வொரு முறையும் PCR அனீலிங் வெப்பநிலையை 1℃ அல்லது 2℃ ஆக அதிகரிக்கவும்.
3.PCR தயாரிப்பு மிகவும் நீளமானது.
பரிந்துரை: ரியல் டைம் பிசிஆர் தயாரிப்பின் நீளம் 100-150 பிபிக்கு இடையில் இருக்க வேண்டும், 500 பிபிக்கு மிகாமல் இருக்க வேண்டும்.
4. ப்ரைமர்கள் சிதைந்தன, மேலும் ப்ரைமர்களின் சிதைவு குறிப்பிட்ட பெருக்கத்தின் தோற்றத்திற்கு வழிவகுக்கும்.
பரிந்துரை: ப்ரைமர்கள் சிதைந்ததா என்பதைக் கண்டறிய SDS-PAGE எலக்ட்ரோபோரேசிஸைப் பயன்படுத்தவும், மேலும் நிகழ்நேர PCR சோதனைகளுக்கு அவற்றைப் புதிய ப்ரைமர்களுடன் மாற்றவும்.
5. PCR அமைப்பு முறையற்றது அல்லது கணினி மிகவும் சிறியது.
பரிந்துரை: PCR எதிர்வினை அமைப்பு மிகவும் சிறியதாக இருப்பதால் கண்டறிதல் துல்லியம் குறையும்.நிகழ்நேர PCR பரிசோதனையை மீண்டும் இயக்க, அளவு PCR கருவியால் பரிந்துரைக்கப்பட்ட எதிர்வினை அமைப்பைப் பயன்படுத்துவது சிறந்தது.
அளவு மதிப்புகளின் மோசமான மறுநிகழ்வு
1. கருவி பழுதடைகிறது.
பரிந்துரை: கருவியின் ஒவ்வொரு PCR துளைக்கும் இடையில் பிழைகள் இருக்கலாம், இதன் விளைவாக வெப்பநிலை மேலாண்மை அல்லது கண்டறிதலின் போது மோசமான மறுஉருவாக்கம் ஏற்படுகிறது.தொடர்புடைய கருவியின் அறிவுறுத்தல்களின்படி சரிபார்க்கவும்.
2. மாதிரி தூய்மை நன்றாக இல்லை.
பரிந்துரை: தூய்மையற்ற மாதிரிகள் சோதனையின் மோசமான மறுஉற்பத்திக்கு வழிவகுக்கும், இதில் டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமர்களின் தூய்மையும் அடங்கும்.டெம்ப்ளேட்டை மீண்டும் சுத்தப்படுத்துவது சிறந்தது, மேலும் ப்ரைமர்கள் SDS-PAGE மூலம் சிறப்பாக சுத்திகரிக்கப்படுகின்றன.
3.PCR அமைப்பு தயாரித்தல் மற்றும் சேமிப்பக நேரம் மிக நீண்டது.
பரிந்துரை: தயாரித்த உடனேயே PCR பரிசோதனைக்கு Real Time PCR சிஸ்டத்தைப் பயன்படுத்தவும், அதிக நேரம் ஒதுக்கி வைக்க வேண்டாம்.
4. PCR பெருக்க நிலைமைகள் பொருத்தமானவை அல்ல, மேலும் ப்ரைமர் வரிசை அல்லது செறிவு முறையற்றது.
பரிந்துரை: ப்ரைமர் வரிசையின் சரியான தன்மையை உறுதிப்படுத்தவும் மற்றும் ப்ரைமர் சிதைக்கப்படவில்லை;பெருக்க சமிக்ஞை நன்றாக இல்லை என்றால், அனீலிங் வெப்பநிலையைக் குறைத்து, ப்ரைமரின் செறிவை சரியான முறையில் சரிசெய்ய முயற்சிக்கவும்.
5. PCR அமைப்பு முறையற்றது அல்லது கணினி மிகவும் சிறியது.
பரிந்துரை: PCR எதிர்வினை அமைப்பு மிகவும் சிறியதாக இருப்பதால் கண்டறிதல் துல்லியம் குறையும்.நிகழ்நேர PCR பரிசோதனையை மீண்டும் இயக்க, அளவு PCR கருவியால் பரிந்துரைக்கப்பட்ட எதிர்வினை அமைப்பைப் பயன்படுத்துவது சிறந்தது.