ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கப்படவில்லை அல்லது ஆர்என்ஏ விளைச்சல் குறைவாக உள்ளது

மீட்புத் திறனைப் பாதிக்கும் பல்வேறு காரணிகள் பெரும்பாலும் உள்ளன, அவை: திசு மாதிரி ஆர்என்ஏ உள்ளடக்கம், செயல்படும் முறை, எலுஷன் அளவு போன்றவை.

1. செயல்பாட்டின் போது பனி குளியல் அல்லது கிரையோஜெனிக் (4 °C) மையவிலக்கு செய்யப்பட்டது.

பரிந்துரை: முழு செயல்முறையிலும் அறை வெப்பநிலையில் (15-25 ° C) இயக்கவும், குறைந்த வெப்பநிலையில் பனி குளியல் மற்றும் மையவிலக்கு செய்ய வேண்டாம்.

2. முறையற்ற மாதிரி பாதுகாப்பு அல்லது அதிகப்படியான மாதிரி சேமிப்பு நேரம்.

பரிந்துரை: மாதிரிகளை -80 °C இல் சேமித்து வைக்கவும் அல்லது திரவ நைட்ரஜனில் உறைய வைக்கவும் மற்றும் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-கரை பயன்படுத்துவதை தவிர்க்கவும்;ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்க புதிய திசு அல்லது வளர்ப்பு செல்களைப் பயன்படுத்த முயற்சிக்கவும்.

3. போதுமான மாதிரி சிதைவு.

பரிந்துரை: திசுவை ஒரே மாதிரியாக மாற்றும் போது, ​​திசு போதுமான அளவில் ஒரே மாதிரியாக இருப்பதையும், திசு செல்கள் ஆர்என்ஏவின் வெளியீட்டை விளக்குவதற்கு போதுமான அளவு பிளவுபடுவதையும் உறுதி செய்யவும்.

4. எலுயன்ட் சரியாக சேர்க்கப்படவில்லை.

பரிந்துரை: RNase-Free ddH என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்₂சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசை மென்படலத்தின் நடுவில் O துளியாக சேர்க்கப்படுகிறது.

5. முழுமையான எத்தனாலின் சரியான அளவு பஃபர் RL2 அல்லது Buffer RW2 இல் சேர்க்கப்படவில்லை.

பரிந்துரை: வழிமுறைகளைப் பின்பற்றி, பஃபர் RL2 மற்றும் Buffer RW2 ஆகியவற்றில் முழுமையான எத்தனாலின் சரியான அளவைச் சேர்த்து, கிட்டைப் பயன்படுத்துவதற்கு முன் நன்கு கலக்கவும்.

6. திசு மாதிரி டோஸ் பொருத்தமானது அல்ல.

பரிந்துரை: 10-20 மி.கி திசு அல்லது (1-5) × 10 பயன்படுத்தவும்⁶500 μl இடையக RL1 செல்கள், அதிகப்படியான திசு பயன்பாடு RNA பிரித்தெடுத்தல் குறைக்கப்படலாம்.

7. முறையற்ற எலுஷன் வால்யூம் அல்லது முழுமையற்ற எலுஷன்.

பரிந்துரை: சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையின் எலுஷன் அளவு 50-200 μl;நீக்குதல் விளைவு திருப்திகரமாக இல்லாவிட்டால், முன் சூடேற்றப்பட்ட RNase-Free ddH ஐச் சேர்த்த பிறகு, அறை வெப்பநிலையில் வைக்கும் நேரத்தை நீட்டிக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.₂ஓ, எ.கா. 5-10 நிமிடம்.

8.பஃபர் RW2 கழுவிய பின் சுத்திகரிப்பு பத்தியில் எத்தனால் எச்சம் உள்ளது.

பரிந்துரை: Buffer RW2 கழுவிய பின் எத்தனால் எச்சம் இருந்தால், 1 நிமிடத்திற்கு வெற்று குழாய் மையவிலக்கு, வெற்று குழாய் மையவிலக்கு செயல்பாட்டிற்கான நேரத்தை 2 நிமிடமாக அதிகரிக்கலாம் அல்லது எச்சத்தை போதுமான அளவு அகற்ற அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடம் சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையை வைக்கலாம். எத்தனால்.

சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ சிதைக்கப்படுகிறது

சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏவின் தரமானது மாதிரியைப் பாதுகாத்தல், RNase மாசுபடுத்துதல் மற்றும் கையாளுதல் போன்ற காரணிகளுடன் தொடர்புடையது.

1. திசு மாதிரிகள் சரியான நேரத்தில் வைக்கப்படுவதில்லை.

பரிந்துரை: திசு மாதிரிகள் அல்லது செல்கள் சேகரிக்கப்பட்ட பிறகு சரியான நேரத்தில் பயன்படுத்தப்படாவிட்டால், உடனடியாக -80 °C அல்லது திரவ நைட்ரஜனில் கிரையோபிரிசர்வ் செய்யவும்.ஆர்என்ஏவைப் பிரித்தெடுக்க, முடிந்தவரை புதிதாக எடுக்கப்பட்ட திசு அல்லது செல் மாதிரியைப் பயன்படுத்தவும்.

2. திசு மாதிரிகள் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-தாவிங்.

பரிந்துரை: திசு மாதிரிகளை சேமிக்கும் போது, ​​அவற்றைப் பாதுகாப்பதற்காக சிறிய துண்டுகளாக வெட்டி, அவற்றைப் பயன்படுத்தும் போது துண்டுகளில் ஒன்றை அகற்றி, மாதிரி மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் RNA சிதைவதைத் தவிர்க்கவும்.

3. RNase அறிமுகப்படுத்தப்பட்டது அல்லது அறுவை சிகிச்சையின் போது செலவழிப்பு கையுறைகள், முகமூடிகள் போன்றவற்றை அணியவில்லை.

பரிந்துரை: ஆர்.என்.ஏ பிரித்தெடுத்தல் பரிசோதனைகள் தனித்தனி ஆர்.என்.ஏ கையாளும் அறைகளில் சிறப்பாகச் செய்யப்படுகின்றன மற்றும் சோதனைக்கு முன் அட்டவணை அழிக்கப்படும்.

RNase இன் அறிமுகத்தால் ஏற்படும் RNA சிதைவைக் குறைக்க, பரிசோதனையின் போது செலவழிக்கக்கூடிய கையுறைகள் மற்றும் முகமூடிகளை அணியுங்கள்.

4. உபயோகத்தின் போது RNase உடன் வினைகள் மாசுபடுகின்றன.

பரிந்துரை: தொடர்புடைய சோதனைகளுக்கு புதிய விலங்கு மொத்த RNA ஐசோலேஷன் கிட் மூலம் மாற்றவும்.

5. ஆர்என்ஏ கையாளுதலில் பயன்படுத்தப்படும் மையவிலக்கு குழாய்கள், குறிப்புகள் போன்றவை RNase உடன் மாசுபட்டுள்ளன.

பரிந்துரை: ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தலில் பயன்படுத்தப்படும் மையவிலக்கு குழாய்கள், குறிப்புகள், பைப்பெட்டுகள் போன்றவை அனைத்தும் RNase இல்லாதவை என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்.

சுத்திகரிக்கப்பட்ட பெறப்பட்ட ஆர்என்ஏ கீழ்நிலை சோதனைகளை பாதிக்கிறது

சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையால் சுத்திகரிக்கப்பட்ட RNA, உப்பு அயனிகள் மிக அதிகமாக இருந்தால், புரத உள்ளடக்கம் கீழ்நிலை பரிசோதனையை பாதிக்கும், அதாவது: ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன், நார்தர்ன் ப்ளாட் மற்றும் பலர்.

1. நீக்கப்பட்ட RNA உப்பு அயனி எச்சங்களைக் கொண்டுள்ளது.

பரிந்துரை: பஃபர் RW2 இல் எத்தனால் சரியான அளவு சேர்க்கப்பட்டுள்ளதை உறுதிசெய்து, செயல்பாட்டிற்கு சுட்டிக்காட்டப்பட்ட மையவிலக்கு வேகத்தில் 2 சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையை கழுவவும்;உப்பு அயனி எச்சம் இருந்தால், அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்களுக்கு சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையை Buffer RW2 க்கு விட்டு, உப்பு மாசுபாட்டை அதிகபட்சமாக அகற்ற மையவிலக்கு செய்யவும்.

2. நீக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏவில் எத்தனால் எச்சம்.

பரிந்துரை: Buffer RW2 கழுவிய பிறகு, அறுவை சிகிச்சைக்கு சுட்டிக்காட்டப்பட்ட மையவிலக்கு வேகத்தில் வெற்று குழாய் மையவிலக்கு செயல்பாட்டைச் செய்யவும், இன்னும் எத்தனால் எச்சம் இருந்தால், வெற்று குழாய் மையவிலக்கு இயக்கத்தின் நேரத்தை 2 நிமிடங்களுக்கு அதிகரிக்கவும் அல்லது அறை வெப்பநிலையில் 5 க்கு விடவும். மீ