செல் நேரடி RT qPCR கிட்-SYBR பச்சை I நேரடி செல் லிசிஸ் செல் தயார் ஒரு-படி qRT-PCR கிட்கள்
விளக்கங்கள்
RT-qPCR எதிர்வினைகளுக்கான வளர்ப்பு செல் மாதிரிகளில் இருந்து ஆர்என்ஏவை விரைவாக வெளியிடக்கூடிய தனித்துவமான லிசிஸ் பஃபர் அமைப்பை இந்தக் கருவி பயன்படுத்துகிறது.RNA டெம்ப்ளேட்டை வெறும் 7 நிமிடங்களில் பெறலாம்.தி 5×நேரடி RT கலவை மற்றும் 2×கிட் மூலம் வழங்கப்படும் நேரடி qPCR Mix-SYBR ரியாஜெண்டுகள் நிகழ்நேர அளவு PCR முடிவுகளை விரைவாகவும் திறம்படமாகவும் பெற முடியும்.
5×நேரடி RT கலவை மற்றும் 2×நேரடி qPCR மிக்ஸ்-SYBR வலுவான தடுப்பான் சகிப்புத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளது, மேலும் மாதிரிகளின் லைசேட்டை நேரடியாக RT-qPCRக்கான டெம்ப்ளேட்டாகப் பயன்படுத்தலாம்.இந்தக் கருவியில் தனித்துவமான ஆர்என்ஏ உயர்-தொடர்பு ஃபோர்ஜீன் ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் மற்றும் ஹாட் டி-டாக் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ், டிஎன்டிபிகள், எம்ஜிசிஎல் ஆகியவை உள்ளன.2, எதிர்வினை தாங்கல், PCR உகப்பாக்கி மற்றும் நிலைப்படுத்தி.
விவரக்குறிப்புகள்
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
கிட் கூறுகள்
| பகுதி I | இடையக CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| இடையக ST | |
| பகுதி II | டிஎன்ஏ அழிப்பான் |
| 5× நேரடி RT கலவை | |
| 2× நேரடி qPCR கலவை-SYBR | |
| 50× ROX குறிப்பு சாயம் | |
| RNase-இலவச ddH2O | |
| வழிமுறைகள் | |
அம்சங்கள் மற்றும் நன்மைகள்
■எளிய மற்றும் பயனுள்ள: செல் டைரக்ட் ஆர்டி தொழில்நுட்பத்துடன், ஆர்என்ஏ மாதிரிகளை வெறும் 7 நிமிடங்களில் பெறலாம்.
■ மாதிரி தேவை சிறியது, 10 செல்கள் வரை சோதனை செய்யலாம்.
■ உயர் செயல்திறன்: இது 384, 96, 24, 12, 6-கிணறு தட்டுகளில் வளர்க்கப்பட்ட செல்களில் ஆர்என்ஏவை விரைவாகக் கண்டறியும்.
■ டிஎன்ஏ அழிப்பான் வெளியிடப்பட்ட மரபணுக்களை விரைவாக நீக்கி, அடுத்தடுத்த சோதனை முடிவுகளில் தாக்கத்தை வெகுவாகக் குறைக்கும்.
■ மேம்படுத்தப்பட்ட RT மற்றும் qPCR அமைப்பு இரண்டு-படி RT-PCR தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனை மிகவும் திறமையானதாகவும், PCR மிகவும் குறிப்பிட்டதாகவும், மேலும் RT-qPCR எதிர்வினை தடுப்பான்களுக்கு அதிக எதிர்ப்புத் திறன் கொண்டதாகவும் ஆக்குகிறது.
கிட் பயன்பாடு
பயன்பாட்டின் நோக்கம்: வளர்ப்பு செல்கள்.
- மாதிரி சிதைவு மூலம் RNA வெளியிடப்பட்டது: இந்தக் கருவியின் RT-qPCR டெம்ப்ளேட்டிற்கு மட்டுமே பொருந்தும்.
- கிட் பின்வரும் நோக்கங்களுக்காகப் பயன்படுத்தப்படலாம்: மரபணு வெளிப்பாடு பகுப்பாய்வு, siRNA-மத்தியஸ்த மரபணு அமைதி விளைவை சரிபார்த்தல், மருந்துப் பரிசோதனை போன்றவை.
வரைபடம்
சேமிப்பு மற்றும் அடுக்கு வாழ்க்கை
இந்த கிட்டின் பகுதி I 4℃ இல் சேமிக்கப்பட வேண்டும்;பகுதி II -20℃ இல் சேமிக்கப்பட வேண்டும்.
Foregene Protease Plus II ஐ 4 இல் சேமிக்க வேண்டும்℃, -20℃ இல் உறைய வேண்டாம்.
ரீஜென்ட் 2×நேரடி qPCR கலவை-SYBR -20 இல் சேமிக்கப்பட வேண்டும்℃இருட்டில்;அடிக்கடி பயன்படுத்தினால், அதை 4 இல் சேமிக்கலாம்℃ குறுகிய கால சேமிப்பிற்கு (10 நாட்களுக்குள் பயன்படுத்தவும்).
ரியல் டைம் பிசிஆர் ப்ரைமர் வடிவமைப்பு கொள்கைகள்
ஃபார்வர்ட் ப்ரைமர் மற்றும் ரிவர்ஸ் ப்ரைமர்
ரியல் டைம் பிசிஆருக்கு, ப்ரைமர் வடிவமைப்பு மிகவும் முக்கியமானது.ப்ரைமர்கள் PCR பெருக்கத்தின் தனித்தன்மை மற்றும் செயல்திறனுடன் தொடர்புடையவை, மேலும் பின்வரும் கொள்கைகளைக் கொண்டு வடிவமைக்க முடியும்:
ப்ரைமர் நீளம்: 18-30bp.
GC உள்ளடக்கம்: 40-60%.
Tm மதிப்பு: ப்ரைமர் 5 போன்ற ப்ரைமர் வடிவமைப்பு மென்பொருள், ப்ரைமரின் Tm மதிப்பைக் கொடுக்கலாம்.அப்ஸ்ட்ரீம் மற்றும் கீழ்நிலை ப்ரைமர்களின் Tm மதிப்புகள் முடிந்தவரை நெருக்கமாக இருக்க வேண்டும்.Tm கணக்கீடு சூத்திரத்தையும் பயன்படுத்தலாம்: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR ஐச் செய்யும்போது, 5 °C இன் ப்ரைமர் Tm மதிப்புக்குக் கீழே உள்ள வெப்பநிலை பொதுவாக அனீலிங் வெப்பநிலையாகத் தேர்ந்தெடுக்கப்படுகிறது (அதனுடன் இணைந்த வெப்பநிலை அதிகரிப்பு PCR எதிர்வினையின் தனித்தன்மையை அதிகரிக்கும்).
ப்ரைமர்கள் மற்றும் PCR தயாரிப்புகள்:
வடிவமைப்பு ப்ரைமர் PCR பெருக்க தயாரிப்பு நீளம் முன்னுரிமை 100-150bp ஆகும்.
டெம்ப்ளேட்டின் இரண்டாம் கட்டமைப்பு பகுதியில் வடிவமைப்பு ப்ரைமர்கள் முடிந்தவரை தவிர்க்கப்பட வேண்டும்.
அப்ஸ்ட்ரீம் மற்றும் டவுன்ஸ்ட்ரீம் ப்ரைமர்களின் 3′ முனைகளுக்கு இடையே 2 அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட நிரப்பு தளங்கள் உருவாகுவதைத் தவிர்க்கவும்.
ப்ரைமர் 3′ டெர்மினல் பேஸ் 3 கூடுதல் தொடர்ச்சியான G அல்லது C உடன் இருக்க முடியாது.
ப்ரைமர்கள் தங்களை நிரப்பு கட்டமைப்புகளைக் கொண்டிருக்க முடியாது, இல்லையெனில் ஒரு ஹேர்பின் அமைப்பு உருவாகும், இது PCR பெருக்கத்தை பாதிக்கும்.
ATCG ப்ரைமர் வரிசையில் முடிந்தவரை சமமாக விநியோகிக்கப்பட வேண்டும், மேலும் 3′ டெர்மினல் பேஸ் T ஆக தவிர்க்கப்பட வேண்டும்.
இணைப்பு 1: செல் நேரடி RT-qPCR கிட் கூறு துணை தொகுப்பு
1.செல் லிசிஸ் தீர்வு
|
| |||
| கிட் கூறுகள் (24-கிணறு சிதைவு அமைப்பு / கிணறு) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 டி | 500 டி | ||
| பகுதிநான் | இடையக CL | 20 மி.லி | 100 மி.லி |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 மிலி × 2 | |
| இடையக ST | 1 மிலி × 2 | 10 மி.லி | |
| பகுதிII | டிஎன்ஏ அழிப்பான் | 400 μl | 1 மிலி × 2 |
2.RT கலவை
|
| |
| கிட் கூறுகள் (20 μl எதிர்வினை அமைப்பு) | DRT-01011-B1 |
| 200 டி | |
| 5× நேரடி RT கலவை | 800 μl |
| RNase-இலவச ddH2O | 1.7 மிலி × 2 |
|
| ||
| கிட் கூறுகள் (20 μl எதிர்வினை அமைப்பு) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 டி | 1000 டி | |
| 2× நேரடி qPCR கலவை-SYBR | 1 மிலி × 2 | 1.7 மிலி × 6 |
| 50× ROX குறிப்பு சாயம் | 40 μl | 200 μl |
| RNase-இலவச ddH2O | 1.7 மி.லி | 10 மி.லி |
அறிவுறுத்தல் கையேடுகள்:
