பெருக்க சமிக்ஞைகள் இல்லை

1.கிட்டில் உள்ள Taq DNA பாலிமரேஸ் முறையற்ற சேமிப்பு அல்லது கிட் காலாவதியானதால் அதன் செயல்பாட்டை இழக்கிறது.
பரிந்துரை: கிட் சேமிப்பு நிலைமைகளை உறுதிப்படுத்தவும்;PCR அமைப்பில் பொருத்தமான அளவு Taq DNA பாலிமரேஸை மீண்டும் சேர்க்கவும் அல்லது தொடர்புடைய சோதனைகளுக்கு புதிய நிகழ்நேர PCR கிட்டை வாங்கவும்.

2.DNA டெம்ப்ளேட்டில் Taq DNA பாலிமரேஸின் தடுப்பான்கள் நிறைய உள்ளன.
பரிந்துரை: டெம்ப்ளேட்டை மீண்டும் சுத்தப்படுத்தவும் அல்லது பயன்படுத்தப்படும் டெம்ப்ளேட்டின் அளவைக் குறைக்கவும்.

3.Mg2+ செறிவு பொருத்தமானது அல்ல.
பரிந்துரை: நாங்கள் வழங்கும் 2× உண்மையான PCR கலவையின் Mg2+ செறிவு 3.5mM ஆகும்.இருப்பினும், சில சிறப்பு ப்ரைமர்கள் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டுகளுக்கு, Mg2+ செறிவு அதிகமாக இருக்கலாம்.எனவே, Mg2+ செறிவை மேம்படுத்த நீங்கள் நேரடியாக MgCl2 ஐ சேர்க்கலாம்.தேர்வுமுறைக்கு ஒவ்வொரு முறையும் Mg2+ 0.5mM ஐ அதிகரிக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

4. PCR பெருக்க நிலைமைகள் பொருத்தமானவை அல்ல, மேலும் ப்ரைமர் வரிசை அல்லது செறிவு முறையற்றது.
பரிந்துரை: ப்ரைமர் வரிசையின் சரியான தன்மையை உறுதிப்படுத்தவும் மற்றும் ப்ரைமர் சிதைக்கப்படவில்லை;பெருக்க சமிக்ஞை நன்றாக இல்லை என்றால், அனீலிங் வெப்பநிலையைக் குறைத்து, ப்ரைமரின் செறிவை சரியான முறையில் சரிசெய்ய முயற்சிக்கவும்.

5.வார்ப்புருவின் அளவு மிகக் குறைவு அல்லது அதிகமாக உள்ளது.
பரிந்துரை: டெம்ப்ளேட் லைனியரைசேஷன் கிரேடியன்ட் டியூஷனைச் செய்து, நிகழ்நேர PCR பரிசோதனைக்கான சிறந்த PCR விளைவுடன் டெம்ப்ளேட் செறிவைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.

NTC மிக அதிக ஒளிர்வு மதிப்பைக் கொண்டுள்ளது

1.செயல்பாட்டின் போது ஏற்படும் எதிர்வினை மாசுபாடு.
பரிந்துரை: ரியல் டைம் பிசிஆர் சோதனைகளுக்குப் புதிய ரியாஜெண்டுகளை மாற்றவும்.

2. PCR எதிர்வினை அமைப்பு தயாரிப்பின் போது மாசுபாடு ஏற்பட்டது.
பரிந்துரை: செயல்பாட்டின் போது தேவையான பாதுகாப்பு நடவடிக்கைகளை எடுக்கவும், அதாவது: லேடெக்ஸ் கையுறைகளை அணிவது, வடிகட்டியுடன் பைப்பெட் முனையைப் பயன்படுத்துதல் போன்றவை.

3. ப்ரைமர்கள் சிதைந்தன, மேலும் ப்ரைமர்களின் சிதைவு குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கத்தை ஏற்படுத்தும்.
பரிந்துரை: ப்ரைமர்கள் சிதைந்ததா என்பதைக் கண்டறிய SDS-PAGE எலக்ட்ரோபோரேசிஸைப் பயன்படுத்தவும், மேலும் நிகழ்நேர PCR சோதனைகளுக்கு அவற்றைப் புதிய ப்ரைமர்களுடன் மாற்றவும்.

ப்ரைமர் டைமர் அல்லது குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கம்

1.Mg2+ செறிவு பொருத்தமானது அல்ல.
பரிந்துரை: நாங்கள் வழங்கும் 2× Real PCR EasyTM கலவையின் Mg2+ செறிவு 3.5 mM ஆகும்.இருப்பினும், சில சிறப்பு ப்ரைமர்கள் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டுகளுக்கு, Mg2+ செறிவு அதிகமாக இருக்கலாம்.எனவே, Mg2+ செறிவை மேம்படுத்த நீங்கள் நேரடியாக MgCl2 ஐ சேர்க்கலாம்.தேர்வுமுறைக்கு ஒவ்வொரு முறையும் Mg2+ 0.5mM ஐ அதிகரிக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

2. PCR அனீலிங் வெப்பநிலை மிகவும் குறைவாக உள்ளது.
பரிந்துரை: ஒவ்வொரு முறையும் PCR அனீலிங் வெப்பநிலையை 1℃ அல்லது 2℃ ஆக அதிகரிக்கவும்.

3.PCR தயாரிப்பு மிகவும் நீளமானது.
பரிந்துரை: ரியல் டைம் பிசிஆர் தயாரிப்பின் நீளம் 100-150 பிபிக்கு இடையில் இருக்க வேண்டும், 500 பிபிக்கு மிகாமல் இருக்க வேண்டும்.

4. ப்ரைமர்கள் சிதைந்தன, மேலும் ப்ரைமர்களின் சிதைவு குறிப்பிட்ட பெருக்கத்தின் தோற்றத்திற்கு வழிவகுக்கும்.
பரிந்துரை: ப்ரைமர்கள் சிதைந்ததா என்பதைக் கண்டறிய SDS-PAGE எலக்ட்ரோபோரேசிஸைப் பயன்படுத்தவும், மேலும் நிகழ்நேர PCR சோதனைகளுக்கு அவற்றைப் புதிய ப்ரைமர்களுடன் மாற்றவும்.

5. PCR அமைப்பு முறையற்றது அல்லது கணினி மிகவும் சிறியது.
பரிந்துரை: PCR எதிர்வினை அமைப்பு மிகவும் சிறியதாக இருப்பதால் கண்டறிதல் துல்லியம் குறையும்.நிகழ்நேர PCR பரிசோதனையை மீண்டும் இயக்க, அளவு PCR கருவியால் பரிந்துரைக்கப்பட்ட எதிர்வினை அமைப்பைப் பயன்படுத்துவது சிறந்தது.

அளவு மதிப்புகளின் மோசமான மறுநிகழ்வு

1. கருவி பழுதடைகிறது.
பரிந்துரை: கருவியின் ஒவ்வொரு PCR துளைக்கும் இடையில் பிழைகள் இருக்கலாம், இதன் விளைவாக வெப்பநிலை மேலாண்மை அல்லது கண்டறிதலின் போது மோசமான மறுஉருவாக்கம் ஏற்படுகிறது.தொடர்புடைய கருவியின் அறிவுறுத்தல்களின்படி சரிபார்க்கவும்.

2. மாதிரி தூய்மை நன்றாக இல்லை.
பரிந்துரை: தூய்மையற்ற மாதிரிகள் சோதனையின் மோசமான மறுஉற்பத்திக்கு வழிவகுக்கும், இதில் டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமர்களின் தூய்மையும் அடங்கும்.டெம்ப்ளேட்டை மீண்டும் சுத்தப்படுத்துவது சிறந்தது, மேலும் ப்ரைமர்கள் SDS-PAGE மூலம் சிறப்பாக சுத்திகரிக்கப்படுகின்றன.

3.PCR அமைப்பு தயாரித்தல் மற்றும் சேமிப்பக நேரம் மிக நீண்டது.
பரிந்துரை: தயாரித்த உடனேயே PCR பரிசோதனைக்கு Real Time PCR சிஸ்டத்தைப் பயன்படுத்தவும், அதிக நேரம் ஒதுக்கி வைக்க வேண்டாம்.

4. PCR பெருக்க நிலைமைகள் பொருத்தமானவை அல்ல, மேலும் ப்ரைமர் வரிசை அல்லது செறிவு முறையற்றது.
பரிந்துரை: ப்ரைமர் வரிசையின் சரியான தன்மையை உறுதிப்படுத்தவும் மற்றும் ப்ரைமர் சிதைக்கப்படவில்லை;பெருக்க சமிக்ஞை நன்றாக இல்லை என்றால், அனீலிங் வெப்பநிலையைக் குறைத்து, ப்ரைமரின் செறிவை சரியான முறையில் சரிசெய்ய முயற்சிக்கவும்.

5. PCR அமைப்பு முறையற்றது அல்லது கணினி மிகவும் சிறியது.
பரிந்துரை: PCR எதிர்வினை அமைப்பு மிகவும் சிறியதாக இருப்பதால் கண்டறிதல் துல்லியம் குறையும்.நிகழ்நேர PCR பரிசோதனையை மீண்டும் இயக்க, அளவு PCR கருவியால் பரிந்துரைக்கப்பட்ட எதிர்வினை அமைப்பைப் பயன்படுத்துவது சிறந்தது.