விலங்குகளின் மொத்த ஆர்என்ஏ தனிமைப்படுத்தல் கருவி மொத்த ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் விலங்கு திசுக்கள் மற்றும் கலத்திற்கான சுத்திகரிப்பு கருவிகள்
கிட் விளக்கம்:
பல்வேறு விலங்கு திசுக்களில் இருந்து உயர் தூய்மை மற்றும் உயர்தர மொத்த ஆர்என்ஏவை விரைவாகவும் திறமையாகவும் பிரித்தெடுக்கவும்.
ஆர்என்ஏ சிதைவு பற்றி கவலைப்பட தேவையில்லை.முழு அமைப்பும் RNase-இலவசமானது
டிஎன்ஏ-சுத்தப்படுத்தும் நெடுவரிசையைப் பயன்படுத்தி டிஎன்ஏவை திறம்பட அகற்றவும்
DNase ஐ சேர்க்காமல் DNA ஐ அகற்றவும்
எளிமையானது - அனைத்து செயல்பாடுகளும் அறை வெப்பநிலையில் முடிக்கப்படுகின்றன
வேகமாக - அறுவை சிகிச்சை 30 நிமிடங்களில் முடிக்கப்படும்
பாதுகாப்பானது - கரிம ரீஜெண்ட் பயன்படுத்தப்படவில்லை
உயர் தூய்மை-OD260/280≈1.8-2.1
தொகுப்பு விளக்கங்கள்
50 தயார்படுத்தல்கள், 200 தயார்படுத்தல்கள்
இந்த கிட் பயன்படுத்துகிறதுசுழல் நெடுவரிசை மற்றும் சூத்திரம்எங்கள் நிறுவனத்தால் உருவாக்கப்பட்டது, இது பல்வேறு விலங்கு திசுக்களில் இருந்து உயர்-தூய்மை மற்றும் உயர்தர மொத்த ஆர்என்ஏவை அதிக செயல்திறனுடன் பிரித்தெடுக்க முடியும். இது திறமையான டிஎன்ஏ-சுத்தப்படுத்தும் நெடுவரிசையை வழங்குகிறது, இது சூப்பர்நேட்டன்ட் மற்றும் திசு லைசேட்டிலிருந்து ஜீனோமிக் டிஎன்ஏவை எளிதில் பிரித்து உறிஞ்சும், எளிமையானது மற்றும் நேரத்தை மிச்சப்படுத்தும்;ஆர்.என்.ஏ-மட்டும் நெடுவரிசையானது ஆர்.என்.ஏ-வைத் திறம்பட பிணைக்க முடியும் மேலும் பல மாதிரிகள் தனித்த சூத்திரத்துடன் ஒரே நேரத்தில் செயலாக்கப்படும்.
முழு அமைப்பும் RNase-இலவசமானது, அதனால் பிரித்தெடுக்கப்பட்ட RNA சிதைந்துவிடாது;Buffer RW1, Buffer RW2 பஃபர் வாஷிங் சிஸ்டம், அதனால் பெறப்பட்ட ஆர்என்ஏ புரதம், டிஎன்ஏ, அயன் மற்றும் கரிம கலவை மாசுபாடு இல்லாமல் இருக்கும்.
கிட் கூறுகள்
| விலங்கு மொத்த ஆர்என்ஏ தனிமைப்படுத்தல் கிட் | ||
| கிட் கூறுகள் | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 டி | 200 டி | |
| Buffer RL1* | 25மிலி | 100மிலி |
| இடையக RL2 | 15மிலி | 60மிலி |
| தாங்கல் RW1* | 25மிலி | 100மிலி |
| தாங்கல் RW2 | 24மிலி | 96மிலி |
| RNase-இலவச ddH2O | 10மிலி | 40மிலி |
| RNA-மட்டும் நெடுவரிசை | 50 | 200 |
| டிஎன்ஏ-சுத்தப்படுத்தும் நெடுவரிசை | 50 | 200 |
| கற்பிப்பு கையேடு | 1 துண்டு | 1 துண்டு |
பண்டத்தின் விபரங்கள்
| வடிவம் | ஸ்பின் நெடுவரிசை | சுத்திகரிப்பு கூறு | ஃபோர்ஜீன் நெடுவரிசை, மறுஉருவாக்கம் |
| ஃப்ளக்ஸ் | 1-24 மாதிரிகள் | ஒரு தயாரிப்புக்கான நேரம் | ~30 நிமிடம் (24 மாதிரிகள்) |
| மையவிலக்கு | மேசை மையவிலக்கு | பைரோலிசிஸ் பிரிப்பு | மையவிலக்கு பிரிப்பு |
| மாதிரி | விலங்கு திசு;செல் | மாதிரிகள் அளவு | திசு: 10-20 மி.கி;செல்:(1-5)×106 |
| எலுஷன் தொகுதி | 50-200 μL | அதிகபட்ச ஏற்றுதல் அளவு | 850 μL |
அம்சங்கள் மற்றும் நன்மைகள்
■ ஆர்என்ஏ சிதைவு பற்றி கவலைப்பட தேவையில்லை;முழு அமைப்பும் RNase-இலவசமானது
■ டிஎன்ஏவைப் பயன்படுத்தி டிஎன்ஏ-சுத்தப்படுத்தும் நெடுவரிசையை திறம்பட அகற்றவும்
■ டிஎன்ஏஸை சேர்க்காமல் டிஎன்ஏவை அகற்றவும்
■ எளிய அனைத்து செயல்பாடுகளும் அறை வெப்பநிலையில் முடிக்கப்படுகின்றன
■ 30 நிமிடங்களில் வேகமாக செயல்படும்
■ பாதுகாப்பானது - கரிம ரீஜென்ட் தேவையில்லை
■ உயர் தூய்மை -OD260/280≈1.8-2.1
கிட் பயன்பாடு
பல்வேறு புதிய அல்லது உறைந்த விலங்கு திசுக்கள் அல்லது வளர்ப்பு உயிரணுக்களிலிருந்து மொத்த ஆர்என்ஏவை பிரித்தெடுத்து சுத்திகரிக்க இது பொருத்தமானது.
தயாரிப்பு அளவுருக்கள்
■ கீழ்நிலை பயன்பாடுகள்: முதல் ஸ்ட்ராண்ட் சிடிஎன்ஏ தொகுப்பு, ஆர்டி-பிசிஆர், மூலக்கூறு குளோனிங், நார்தர்ன் ப்ளாட் போன்றவை.
■ மாதிரிகள்: விலங்கு திசுக்கள், வளர்ப்பு செல்கள்
■ மருந்தளவு: திசுக்கள் 10-20mg, செல்கள்(2-5)×106
■ சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையின் அதிகபட்ச டிஎன்ஏ பிணைப்பு திறன்: 80 μg
■ எலுஷன் அளவு: 50-200 μl
வரைபடம்
விலங்குகளின் மொத்த RNA தனிமைப்படுத்தல் கருவி 20mg சிகிச்சை
புதிய சுட்டி மாதிரிகள், 5% சுத்திகரிக்கப்பட்ட மொத்த RNA 1% அகார் எடுத்துக் கொள்ளுங்கள்
கிளைகோஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ்
1: மண்ணீரல் 2: சிறுநீரகம்
3: கல்லீரல் 4: இதயம்
சேமிப்பு மற்றும் அடுக்கு வாழ்க்கை
கிட் அறை வெப்பநிலையில் (15-25 ℃) அல்லது 2-8 ℃ நீண்ட காலத்திற்கு 24 மாதங்கள் சேமிக்கப்படும்.Buffer RL1 ஐ 4℃ இல் 1 மாதத்திற்கு β- mercaptoethanol (விரும்பினால்) சேர்த்த பிறகு சேமிக்கலாம்.
மேற்கோள் காட்டப்பட்ட கட்டுரைகள்
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.எம்ஆர்என்ஏ-ஏற்றப்பட்ட லிப்பிட் போன்ற நானோ துகள்கள் மத்திய கூட்டு வடிவமைப்பின் உகப்பாக்கம் வழியாக கல்லீரல் அடிப்படை திருத்தம்.அட்வ.செயல்பாடு.மேட்டர்.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:அவர் எக்ஸ், ஹாங் டபிள்யூ, யாங் ஜே மற்றும் பலர்.சிகிச்சை ஸ்டெம் செல் தயாரிப்பில் உள்ள செல்களின் தன்னிச்சையான அப்போப்டொசிஸ், பாஸ்பாடிடைல்செரின் வெளியீட்டின் மூலம் இம்யூனோமோடூலேட்டரி விளைவுகளை ஏற்படுத்துகிறது.சிக்னல் டிரான்ஸ்டக்ட் இலக்கு தெர்.2021 ஜூலை 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA மாற்றம் ஆன்கோஜெனிக் mRNA மொழிபெயர்ப்பை மேம்படுத்துகிறது மற்றும் intrahepatic cholangiocarcinoma முன்னேற்றத்தை ஊக்குவிக்கிறது.மோல் செல்.2021 ஜூலை 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225:காவ் எக்ஸ், ஷு ஒய், சென் ஒய், மற்றும் பலர்.Mettl14-மத்தியஸ்த m6A மாற்றம், எண்டோபிளாஸ்மிக் ரெட்டிகுலம் ஹோமியோஸ்டாசிஸைப் பராமரிப்பதன் மூலம் கல்லீரல் மீளுருவாக்கம் எளிதாக்குகிறது.செல் மோல் காஸ்ட்ரோஎன்டரால் ஹெபடோல்.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
ஆர்என்ஏ தனிமைப்படுத்தல் கருவிகள் மற்ற மாதிரி ஆதாரங்கள்அவைகள் உள்ளன:
செல், செடி, வைரஸ், ரத்தம் போன்றவை.
ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கப்படவில்லை அல்லது ஆர்என்ஏ விளைச்சல் குறைவாக உள்ளது
மீட்புத் திறனைப் பாதிக்கும் பல்வேறு காரணிகள் பெரும்பாலும் உள்ளன, அவை: திசு மாதிரி ஆர்என்ஏ உள்ளடக்கம், செயல்படும் முறை, எலுஷன் அளவு போன்றவை.
1. செயல்பாட்டின் போது பனி குளியல் அல்லது கிரையோஜெனிக் (4 °C) மையவிலக்கு செய்யப்பட்டது.
பரிந்துரை: முழு செயல்முறையிலும் அறை வெப்பநிலையில் (15-25 ° C) இயக்கவும், குறைந்த வெப்பநிலையில் பனி குளியல் மற்றும் மையவிலக்கு செய்ய வேண்டாம்.
2. முறையற்ற மாதிரி பாதுகாப்பு அல்லது அதிகப்படியான மாதிரி சேமிப்பு நேரம்.
பரிந்துரை: மாதிரிகளை -80 °C இல் சேமித்து வைக்கவும் அல்லது திரவ நைட்ரஜனில் உறைய வைக்கவும் மற்றும் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-கரை பயன்படுத்துவதை தவிர்க்கவும்;ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்க புதிய திசு அல்லது வளர்ப்பு செல்களைப் பயன்படுத்த முயற்சிக்கவும்.
3. போதுமான மாதிரி சிதைவு.
பரிந்துரை: திசுவை ஒரே மாதிரியாக மாற்றும் போது, திசு போதுமான அளவில் ஒரே மாதிரியாக இருப்பதையும், திசு செல்கள் ஆர்என்ஏவின் வெளியீட்டை விளக்குவதற்கு போதுமான அளவு பிளவுபடுவதையும் உறுதி செய்யவும்.
4. எலுயன்ட் சரியாக சேர்க்கப்படவில்லை.
பரிந்துரை: RNase-Free ddH என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்2சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசை மென்படலத்தின் நடுவில் O துளியாக சேர்க்கப்படுகிறது.
5. முழுமையான எத்தனாலின் சரியான அளவு பஃபர் RL2 அல்லது Buffer RW2 இல் சேர்க்கப்படவில்லை.
பரிந்துரை: வழிமுறைகளைப் பின்பற்றி, பஃபர் RL2 மற்றும் Buffer RW2 ஆகியவற்றில் முழுமையான எத்தனாலின் சரியான அளவைச் சேர்த்து, கிட்டைப் பயன்படுத்துவதற்கு முன் நன்கு கலக்கவும்.
6. திசு மாதிரி டோஸ் பொருத்தமானது அல்ல.
பரிந்துரை: 10-20 மி.கி திசு அல்லது (1-5) × 10 பயன்படுத்தவும்6500 μl இடையக RL1 செல்கள், அதிகப்படியான திசு பயன்பாடு RNA பிரித்தெடுத்தல் குறைக்கப்படலாம்.
7. முறையற்ற எலுஷன் வால்யூம் அல்லது முழுமையற்ற எலுஷன்.
பரிந்துரை: சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையின் எலுஷன் அளவு 50-200 μl;நீக்குதல் விளைவு திருப்திகரமாக இல்லாவிட்டால், முன் சூடேற்றப்பட்ட RNase-Free ddH ஐச் சேர்த்த பிறகு, அறை வெப்பநிலையில் வைக்கும் நேரத்தை நீட்டிக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.2ஓ, எ.கா. 5-10 நிமிடம்.
8.பஃபர் RW2 கழுவிய பின் சுத்திகரிப்பு பத்தியில் எத்தனால் எச்சம் உள்ளது.
பரிந்துரை: Buffer RW2 கழுவிய பிறகு எத்தனால் எச்சம் இருந்தால், 1 நிமிடத்திற்கு வெற்று குழாய் மையவிலக்கு, வெற்று குழாய் மையவிலக்கு செயல்பாட்டிற்கான நேரத்தை 2 நிமிடங்களுக்கு அதிகரிக்கலாம் அல்லது எஞ்சிய எத்தனாலை போதுமான அளவு அகற்ற அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடம் சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையை வைக்கலாம்.
சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ சிதைக்கப்படுகிறது
சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏவின் தரமானது மாதிரியைப் பாதுகாத்தல், RNase மாசுபடுத்துதல் மற்றும் கையாளுதல் போன்ற காரணிகளுடன் தொடர்புடையது.
1. திசு மாதிரிகள் சரியான நேரத்தில் வைக்கப்படுவதில்லை.
பரிந்துரை: திசு மாதிரிகள் அல்லது செல்கள் சேகரிக்கப்பட்ட பிறகு சரியான நேரத்தில் பயன்படுத்தப்படாவிட்டால், உடனடியாக -80 °C அல்லது திரவ நைட்ரஜனில் கிரையோபிரிசர்வ் செய்யவும்.ஆர்என்ஏவைப் பிரித்தெடுக்க, முடிந்தவரை புதிதாக எடுக்கப்பட்ட திசு அல்லது செல் மாதிரியைப் பயன்படுத்தவும்.
2. திசு மாதிரிகள் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-தாவிங்.
பரிந்துரை: திசு மாதிரிகளை சேமிக்கும் போது, அவற்றைப் பாதுகாப்பதற்காக சிறிய துண்டுகளாக வெட்டி, அவற்றைப் பயன்படுத்தும் போது துண்டுகளில் ஒன்றை அகற்றி, மாதிரி மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் RNA சிதைவதைத் தவிர்க்கவும்.
3. RNase அறிமுகப்படுத்தப்பட்டது அல்லது அறுவை சிகிச்சையின் போது செலவழிப்பு கையுறைகள், முகமூடிகள் போன்றவற்றை அணியவில்லை.
பரிந்துரை: ஆர்.என்.ஏ பிரித்தெடுத்தல் பரிசோதனைகள் தனித்தனி ஆர்.என்.ஏ கையாளும் அறைகளில் சிறப்பாகச் செய்யப்படுகின்றன மற்றும் சோதனைக்கு முன் அட்டவணை அழிக்கப்படும்.
RNase இன் அறிமுகத்தால் ஏற்படும் RNA சிதைவைக் குறைக்க, பரிசோதனையின் போது செலவழிக்கக்கூடிய கையுறைகள் மற்றும் முகமூடிகளை அணியுங்கள்.
4. உபயோகத்தின் போது RNase உடன் வினைகள் மாசுபடுகின்றன.
பரிந்துரை: தொடர்புடைய சோதனைகளுக்கு புதிய விலங்கு மொத்த RNA ஐசோலேஷன் கிட் மூலம் மாற்றவும்.
5. ஆர்என்ஏ கையாளுதலில் பயன்படுத்தப்படும் மையவிலக்கு குழாய்கள், குறிப்புகள் போன்றவை RNase உடன் மாசுபட்டுள்ளன.
பரிந்துரை: ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தலில் பயன்படுத்தப்படும் மையவிலக்கு குழாய்கள், குறிப்புகள், பைப்பெட்டுகள் போன்றவை அனைத்தும் RNase இல்லாதவை என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்.
சுத்திகரிக்கப்பட்ட பெறப்பட்ட ஆர்என்ஏ கீழ்நிலை சோதனைகளை பாதிக்கிறது
சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையால் சுத்திகரிக்கப்பட்ட RNA, உப்பு அயனிகள் மிக அதிகமாக இருந்தால், புரத உள்ளடக்கம் கீழ்நிலை பரிசோதனையை பாதிக்கும், அதாவது: ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன், நார்தர்ன் ப்ளாட் மற்றும் பலர்.
1. நீக்கப்பட்ட RNA உப்பு அயனி எச்சங்களைக் கொண்டுள்ளது.
பரிந்துரை: பஃபர் RW2 இல் எத்தனால் சரியான அளவு சேர்க்கப்பட்டுள்ளதை உறுதிசெய்து, செயல்பாட்டிற்கு சுட்டிக்காட்டப்பட்ட மையவிலக்கு வேகத்தில் 2 சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையை கழுவவும்;உப்பு அயனி எச்சம் இருந்தால், அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்களுக்கு சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையை Buffer RW2 க்கு விட்டு, உப்பு மாசுபாட்டை அதிகபட்சமாக அகற்ற மையவிலக்கு செய்யவும்.
2. நீக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏவில் எத்தனால் எச்சம்.
பரிந்துரை: Buffer RW2 கழுவிய பிறகு, அறுவை சிகிச்சைக்கு சுட்டிக்காட்டப்பட்ட மையவிலக்கு வேகத்தில் வெற்று குழாய் மையவிலக்கு செயல்பாட்டைச் செய்யவும், இன்னும் எத்தனால் எச்சம் இருந்தால், வெற்று குழாயின் மையவிலக்கு செயல்பாட்டை 2 நிமிடங்களாக அதிகரிக்கவும் அல்லது அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்களுக்கு விடவும் என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்.
