நேரடி RT-qPCR கிட் II
கிட் விளக்கம்:
◮நேரடி RT-qPCR கிட், Foreasy ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் மற்றும் Foreasy HS Taq DNA பாலிமரேஸ் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி, Foregene உருவாக்குகிறது, தனித்துவமான எதிர்வினை இடையகத்துடன், இந்த கருவியை வலுவான எதிர்ப்பு மற்றும் இணக்கத்தன்மையுடன் உருவாக்குகிறது, மேலும் இது Foregene Lysis அமைப்பை டெம்ப்ளேட்டாக நேரடியாக சோதிக்க முடியும்.இந்த கிட் கோவிட்-19 நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் கிட் மற்றும் பிற நோய்க்கிருமி பாக்டீரியா நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் கிட் மேம்பாட்டிற்கு விண்ணப்பிக்கலாம்.
விளக்கம்
நேரடி RT-qPCR கிட் தனித்தனியாக தொகுக்கப்பட்ட RT-qPCR இடையகத்தை வழங்குகிறது, அதிக திறன் கொண்ட Foreasy HS Taq DNA பாலிமரேஸ்மற்றும் முன்னோடி தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் (MMLV),எளிய சரிபார்ப்பிற்குள், பின்-இறுதிக் கருவிகளை உருவாக்குவதற்கும் கணினி சரிசெய்தலுக்கும் வசதியாக அமைகிறது.
நேரடி RT-qPCR கிட், Foreasy ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் மற்றும் Foreasy HS Taq DNA பாலிமரேஸ் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி, Foregene உருவாக்குகிறது, தனித்துவமான எதிர்வினை இடையகத்துடன், இந்த கருவியை வலுவான எதிர்ப்பு மற்றும் இணக்கத்தன்மையுடன் உருவாக்குகிறது, மேலும் இது Foregene Lysis அமைப்பை டெம்ப்ளேட்டாக நேரடியாக சோதிக்க முடியும்.இந்த கிட் கோவிட்-19 நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் கிட் மற்றும் பிற நோய்க்கிருமி பாக்டீரியா நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் கிட் மேம்பாட்டிற்கு விண்ணப்பிக்கலாம்.
இந்த கிட் நேரடியாக IVD தயாரிப்பின் அங்கமாக இருக்கலாம், எளிதாகவும் வேகமாகவும் பயன்படுத்தலாம்.அதை மீண்டும் உருவாக்காமல், எளிதான சரிபார்ப்பு மட்டுமே தேவை.
விவரக்குறிப்புகள்
500T, 50,000T
கிட் கூறுகள்
| கிட் உள்ளடக்கங்கள் (20 μL எதிர்வினை அமைப்பு) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 டி | 50,000 டி | |
| முன்னோடி ஆர்எவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் (200 U/μL) | 50 μL× 1 | 1 மி.லி× 5 |
| Foreasy HS Taq DNA பாலிமரேஸ் (5 U/μL) | 100 μL× 1 | 1 மி.லி× 10 |
| 2× நேரடி RT-qPCRதாங்கல் | 1 மிலி × 5 | 500 மிலி × 1 |
| அறிவுறுத்தல் | 1 | 1 |
செயல்பாட்டு படிகள்
ப: டெம்ப்ளேட் மற்றும் வினைப்பொருளை தயார் செய்தல்
1. தயாரிக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட்டை (ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட்டை பிரித்தெடுக்க மற்றும் சுத்திகரிக்க ஃபோர்ஜீன் டோட்டல் ஆர்என்ஏ ஐசோலேஷன் கிட் தொடர் கிட் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது) அல்லது மாதிரி கிராக்கிங் தயாரிப்பு (ஃபோர்ஜீன் லைசிஸ் சிஸ்டம் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது), குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள் (10 μM) மற்றும் பிற தொடர்புடைய நுகர்பொருட்கள், கருவி.
2. 2× டைரக்ட் RT-qPCR பஃபர், RNase-Free ddH2O மற்றும் 20× ROX குறிப்பு சாயம் (தேவைப்பட்டால்) ஐஸ் உள்ள பெட்டியில் வைத்து, இவை இயற்கையாக உருகி, மெதுவாக கலக்கவும்.
பி: RT-qPCR அமைப்பைத் தயாரிக்கவும்
எதிர்வினை அமைப்பின் எதிர்வினை இடையகத்தின் பாதி அளவைப் பெறுங்கள் (எடுத்துக்காட்டாக, அமைப்பின் அளவு 20 μL என்றால், அது 10 μL 2× நேரடி RT-qPCR இடையகத்தைப் பெற வேண்டும்). க்குநொதியின் தொடர்புடைய அளவு, என்று பரிந்துரைக்கிறோம்M-MLV: 10-30 U/20 μL எதிர்வினை அமைப்பு,Taqடிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்：1-2 U/20 μL எதிர்வினை அமைப்புஇது எங்கள் பரிந்துரை, நீங்கள் அதை சோதித்து சரிசெய்ய வேண்டும்), RNA டெம்ப்ளேட், குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுகளைச் சேர்க்கவும், RNase-Free ddH ஐச் சேர்க்கவும்2O முதல் 20 μL வரை.RT-qPCR எதிர்வினை அமைப்பின் குறிப்பிட்ட தயாரிப்பை பின்வரும் அட்டவணை 1ல் குறிப்பிடலாம்.
அட்டவணை 1 : RT-qPCR அமைப்பைத் தயாரித்தல்
| கூறு | தொகுதி | இறுதி செறிவு |
| 2× நேரடி RT-qPCR இடையக | 10 μL | 1× |
| முன்னோடி தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் (எம்எம்எல்வி) | 10-30 யூ | |
| Foreasy HS Taq DNA பாலிமரேஸ் | 1-2 யூ | |
| முன்னோக்கி ப்ரைமர் (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| ரிவர்ஸ் ப்ரைமர்(10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| ஆய்வு(4 μM) | 1 μL | 200nM |
| டெம்ப்ளேட்(ஆர்என்ஏ அல்லது லைசேட்) | X μL | |
| 20× ROX குறிப்பு சாயம் | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| மொத்த தொகுதி | 20 μL |
குறிப்பு: ஃபார்வர்ட் ப்ரைமர் மற்றும் ரிவர்ஸ் ப்ரைமர் ஆகியவை இலக்கு மரபணுவின் குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள்.qPCR இன் அமைப்பு நடைமுறை சோதனை மற்றும் PCR மாதிரிகளுக்கு ஏற்ப சரிசெய்யப்படலாம்.பெரும்பாலான ப்ரைமர்களின் இறுதி செறிவுக்கு 400nM பரிந்துரைக்கிறோம்.தயாரிக்கப்பட்ட செறிவு மற்றும் பரிந்துரைக்கப்பட்ட இறுதி செறிவு ஆகியவற்றின் படி குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுகளின் அளவை சரிசெய்யவும்.
1*: வெவ்வேறு அளவு PCR கருவிகளின்படி ROX குறிப்பு சாயத்தின் பொருத்தமான இறுதி செறிவைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.பொதுவான அளவு PCR கருவிகளின் உகந்த ROX குறிப்பு சாய செறிவு பின்வரும் அட்டவணையில் காட்டப்பட்டுள்ளது:
| அளவு PCR கருவிகள் | ROX குறிப்பு சாயத்தின் இறுதி செறிவு |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/படி ஒன்று,முதலியன | 1× (எடுத்துக்காட்டாக, 20 μL எதிர்வினை அமைப்பில் 1μl 20×ROX குறிப்பு சாயத்தைச் சேர்க்கவும்) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P மற்றும் Mx4000 போன்றவை. | 0.5× (எடுத்துக்காட்டாக, 20 μL எதிர்வினை அமைப்பில் 0.5μl 20×ROX குறிப்பு சாயத்தைச் சேர்க்கவும்) |
| ரோச் பிசிஆர் கருவி, பயோ-ராட் பிசிஆர் கருவி, எபென்டார்ஃப் அளவு பிசிஆர் கருவி போன்றவை. | ROX குறிப்பு சாயம் இல்லாமல் |
சேமிப்பு மற்றும் அடுக்கு வாழ்க்கை
கிட் -20 ± 5℃ இல் சேமிக்கப்பட வேண்டும்.இது உடனடியாக -20℃ தெர்மோஸ்டாடிக் குளிர்சாதன பெட்டியில் சேமிக்கப்பட வேண்டும்.பொருத்தமான நிலையில் சேமிக்கப்பட்டால் செல்லுபடியாகும் காலம் 2 ஆண்டுகள் ஆகும்.
