Foreasy HS Taq DNA பாலிமரேஸ்
விளக்கம்
Foreasy HS Taq DNA பாலிமரேஸ் என்பது ஒரு புதிய Taq என்சைம் ஆகும், இது Escherichia coli இன்ஜினியரிங் பாக்டீரியாவில் மரபணு மறுசீரமைப்பு தொழில்நுட்பத்தால் வெளிப்படுத்தப்படுகிறது.என்சைம் ஒரு சிறப்பு செயல்முறை சிகிச்சை பிறகு, அது'வெப்பச் செயலாக்கத்திற்கு முன் அதன் செயல்பாடு தடுக்கப்படுகிறது, இதன் மூலம் குறைந்த வெப்பநிலை நிலைகளின் கீழ் ப்ரைமர்கள் அல்லது ப்ரைமர் டைமர்களின் குறிப்பிட்ட அல்லாத அனீலிங் மூலம் ஏற்படும் குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கத்தைத் தடுக்கிறது.இந்த தயாரிப்பு மிகவும் குறிப்பிட்ட PCR எதிர்வினைக்கு ஏற்றதுஅயனி, M ultiple x PCR, உயர் GC உள்ளடக்கம் (> 60%)உடன்இரண்டாம் நிலை அமைப்புஅல்லது வேறுவலுவான பின்னணி மரபணுஐசிஎஸ்பெருக்கம் மற்றும் பெரிய அளவிலான மரபணுஐசிஎஸ்பெருக்கம் கண்டறிதல்.நொதியில் 5' → 3' டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் செயல்பாடு மற்றும் 5' → 3' எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாடு உள்ளது, ஆனால் 3' → 5' எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாடு இல்லை.
கிட் கூறுகள்
கூறு | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
Foreasy HS Taq DNA பாலிமரேஸ் (5 U/μL) | 5000 யூ (1 மிலி) | 50 KU (10 மிலி) | 500 KU (100 மிலி) |
2× Taq எதிர்வினை தாங்கல் | 25மிலி × 5 | 250 மிலி × 5 | 500 மிலி × 25 |
அம்சங்கள் மற்றும் நன்மைகள்
- உயர் விவரக்குறிப்பு: அதிக சூடான-தொடக்க செயல்பாடு கொண்ட நொதி.
- வேகமான பெருக்கம்: 10 நொடி/kb.
- உயர் டெம்ப்ளேட் ஏற்புத்திறன்: உயர்வை திறம்படப் பெருக்கப் பயன்படுத்தலாம்GCமதிப்புமற்றும்பல்வேறு கடினமான-பெருக்கி டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்.
- வலுவான நம்பகத்தன்மை: நம்பகத்தன்மை 6 மடங்குof சாதாரண Taq என்சைம்.
கிட் பயன்பாடு
- பல்வேறு PCR/qPCR அமைப்பு மற்றும் நேரடி PCR அமைப்பு
- PCR பெருக்கப்பட்ட DNA துண்டு
- டிஎன்ஏ குறி
- டிஎன்ஏ வரிசைமுறை
- பிசிஆர் பிளஸ் ஏ டெயில்
செயல்பாடு வரையறை
1U : 10 nmol ஐ இணைக்க தேவையான நொதியின் அளவுடிஎன்ஏசெயல்படுத்தப்பட்ட சால்மன் விந்தணு டிஎன்ஏவை டெம்ப்ளேட் / ப்ரைமர், 74 °C, 30 நிமிடங்களாகப் பயன்படுத்தி அமில-கரையாத பொருளில்.
எதிர்வினை நிலை
வெப்ப நிலை | எதிர்வினை நேரம் | சுழற்சி நேரம் |
37°C | 5 நிமிடம் | 1 |
94°C | 5 நிமிடம் | 1 |
94°C | 10 வினாடிகள் | 40 |
60°C | 10 வினாடிகள் |
குறிப்பு:10 µL மற்றும் 20 µL அமைப்புகளுக்கு, தெர்மல் சைக்லரில் வெப்ப மூடி இல்லை என்றால் சம அளவு மினரல் ஆயிலைச் சேர்க்கவும்.
PCR எதிர்வினை நிலைமைகள் வார்ப்புருக்கள், ப்ரைமர்கள் மற்றும் பலவற்றின் கட்டமைப்பு நிலைமைகளைப் பொறுத்து மாறுபடும்.குறிப்பிட்ட செயல்பாட்டில், டெம்ப்ளேட் வகை, இலக்கு துண்டின் அளவு, பெருக்கப்பட்ட துண்டின் அடிப்படை வரிசை மற்றும் ப்ரைமரின் GC உள்ளடக்கம் மற்றும் நீளம் போன்ற குறிப்பிட்ட நிபந்தனைகளுக்கு ஏற்ப, அனீலிங் வெப்பநிலை, நீட்டிப்பு நேரம், முதலியன உள்ளிட்ட உகந்த எதிர்வினை நிலைமைகளை வடிவமைக்க வேண்டியது அவசியம்.
சேமிப்பு
2 ஆண்டுகளுக்கு -20 ± 5 °C அல்லது நீண்ட கால சேமிப்பிற்கு -80 °C.
பெருக்க சமிக்ஞைகள் இல்லை
1.கிட்டில் உள்ள Taq DNA பாலிமரேஸ் முறையற்ற சேமிப்பு அல்லது கிட் காலாவதியானதால் அதன் செயல்பாட்டை இழக்கிறது.
பரிந்துரை: கிட் சேமிப்பு நிலைமைகளை உறுதிப்படுத்தவும்;PCR அமைப்பில் பொருத்தமான அளவு Taq DNA பாலிமரேஸை மீண்டும் சேர்க்கவும் அல்லது தொடர்புடைய சோதனைகளுக்கு புதிய நிகழ்நேர PCR கிட்டை வாங்கவும்.
2.DNA டெம்ப்ளேட்டில் Taq DNA பாலிமரேஸின் தடுப்பான்கள் நிறைய உள்ளன.
பரிந்துரை: டெம்ப்ளேட்டை மீண்டும் சுத்தப்படுத்தவும் அல்லது பயன்படுத்தப்படும் டெம்ப்ளேட்டின் அளவைக் குறைக்கவும்.
3.Mg2+ செறிவு பொருத்தமானது அல்ல.
பரிந்துரை: நாங்கள் வழங்கும் 2× உண்மையான PCR கலவையின் Mg2+ செறிவு 3.5mM ஆகும்.இருப்பினும், சில சிறப்பு ப்ரைமர்கள் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டுகளுக்கு, Mg2+ செறிவு அதிகமாக இருக்கலாம்.எனவே, Mg2+ செறிவை மேம்படுத்த நீங்கள் நேரடியாக MgCl2 ஐ சேர்க்கலாம்.தேர்வுமுறைக்கு ஒவ்வொரு முறையும் Mg2+ 0.5mM ஐ அதிகரிக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
4. PCR பெருக்க நிலைமைகள் பொருத்தமானவை அல்ல, மேலும் ப்ரைமர் வரிசை அல்லது செறிவு முறையற்றது.
பரிந்துரை: ப்ரைமர் வரிசையின் சரியான தன்மையை உறுதிப்படுத்தவும் மற்றும் ப்ரைமர் சிதைக்கப்படவில்லை;பெருக்க சமிக்ஞை நன்றாக இல்லை என்றால், அனீலிங் வெப்பநிலையைக் குறைத்து, ப்ரைமரின் செறிவை சரியான முறையில் சரிசெய்ய முயற்சிக்கவும்.
5.வார்ப்புருவின் அளவு மிகக் குறைவு அல்லது அதிகமாக உள்ளது.
பரிந்துரை: டெம்ப்ளேட் லைனியரைசேஷன் கிரேடியன்ட் டியூஷனைச் செய்து, நிகழ்நேர PCR பரிசோதனைக்கான சிறந்த PCR விளைவுடன் டெம்ப்ளேட் செறிவைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
NTC மிக அதிக ஒளிர்வு மதிப்பைக் கொண்டுள்ளது
1.செயல்பாட்டின் போது ஏற்படும் எதிர்வினை மாசுபாடு.
பரிந்துரை: ரியல் டைம் பிசிஆர் சோதனைகளுக்குப் புதிய ரியாஜெண்டுகளை மாற்றவும்.
2. PCR எதிர்வினை அமைப்பு தயாரிப்பின் போது மாசுபாடு ஏற்பட்டது.
பரிந்துரை: செயல்பாட்டின் போது தேவையான பாதுகாப்பு நடவடிக்கைகளை எடுக்கவும், அதாவது: லேடெக்ஸ் கையுறைகளை அணிவது, வடிகட்டியுடன் பைப்பெட் முனையைப் பயன்படுத்துதல் போன்றவை.
3. ப்ரைமர்கள் சிதைந்தன, மேலும் ப்ரைமர்களின் சிதைவு குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கத்தை ஏற்படுத்தும்.
பரிந்துரை: ப்ரைமர்கள் சிதைந்ததா என்பதைக் கண்டறிய SDS-PAGE எலக்ட்ரோபோரேசிஸைப் பயன்படுத்தவும், மேலும் நிகழ்நேர PCR சோதனைகளுக்கு அவற்றைப் புதிய ப்ரைமர்களுடன் மாற்றவும்.
ப்ரைமர் டைமர் அல்லது குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கம்
1.Mg2+ செறிவு பொருத்தமானது அல்ல.
பரிந்துரை: நாங்கள் வழங்கும் 2× Real PCR EasyTM கலவையின் Mg2+ செறிவு 3.5 mM ஆகும்.இருப்பினும், சில சிறப்பு ப்ரைமர்கள் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டுகளுக்கு, Mg2+ செறிவு அதிகமாக இருக்கலாம்.எனவே, Mg2+ செறிவை மேம்படுத்த நீங்கள் நேரடியாக MgCl2 ஐ சேர்க்கலாம்.தேர்வுமுறைக்கு ஒவ்வொரு முறையும் Mg2+ 0.5mM ஐ அதிகரிக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
2. PCR அனீலிங் வெப்பநிலை மிகவும் குறைவாக உள்ளது.
பரிந்துரை: ஒவ்வொரு முறையும் PCR அனீலிங் வெப்பநிலையை 1℃ அல்லது 2℃ ஆக அதிகரிக்கவும்.
3.PCR தயாரிப்பு மிகவும் நீளமானது.
பரிந்துரை: ரியல் டைம் பிசிஆர் தயாரிப்பின் நீளம் 100-150 பிபிக்கு இடையில் இருக்க வேண்டும், 500 பிபிக்கு மிகாமல் இருக்க வேண்டும்.
4. ப்ரைமர்கள் சிதைந்தன, மேலும் ப்ரைமர்களின் சிதைவு குறிப்பிட்ட பெருக்கத்தின் தோற்றத்திற்கு வழிவகுக்கும்.
பரிந்துரை: ப்ரைமர்கள் சிதைந்ததா என்பதைக் கண்டறிய SDS-PAGE எலக்ட்ரோபோரேசிஸைப் பயன்படுத்தவும், மேலும் நிகழ்நேர PCR சோதனைகளுக்கு அவற்றைப் புதிய ப்ரைமர்களுடன் மாற்றவும்.
5. PCR அமைப்பு முறையற்றது அல்லது கணினி மிகவும் சிறியது.
பரிந்துரை: PCR எதிர்வினை அமைப்பு மிகவும் சிறியதாக இருப்பதால் கண்டறிதல் துல்லியம் குறையும்.நிகழ்நேர PCR பரிசோதனையை மீண்டும் இயக்க, அளவு PCR கருவியால் பரிந்துரைக்கப்பட்ட எதிர்வினை அமைப்பைப் பயன்படுத்துவது சிறந்தது.
அளவு மதிப்புகளின் மோசமான மறுநிகழ்வு
1. கருவி பழுதடைகிறது.
பரிந்துரை: கருவியின் ஒவ்வொரு PCR துளைக்கும் இடையில் பிழைகள் இருக்கலாம், இதன் விளைவாக வெப்பநிலை மேலாண்மை அல்லது கண்டறிதலின் போது மோசமான மறுஉருவாக்கம் ஏற்படுகிறது.தொடர்புடைய கருவியின் அறிவுறுத்தல்களின்படி சரிபார்க்கவும்.
2. மாதிரி தூய்மை நன்றாக இல்லை.
பரிந்துரை: தூய்மையற்ற மாதிரிகள் சோதனையின் மோசமான மறுஉற்பத்திக்கு வழிவகுக்கும், இதில் டெம்ப்ளேட் மற்றும் ப்ரைமர்களின் தூய்மையும் அடங்கும்.டெம்ப்ளேட்டை மீண்டும் சுத்தப்படுத்துவது சிறந்தது, மேலும் ப்ரைமர்கள் SDS-PAGE மூலம் சிறப்பாக சுத்திகரிக்கப்படுகின்றன.
3.PCR அமைப்பு தயாரித்தல் மற்றும் சேமிப்பக நேரம் மிக நீண்டது.
பரிந்துரை: தயாரித்த உடனேயே PCR பரிசோதனைக்கு Real Time PCR சிஸ்டத்தைப் பயன்படுத்தவும், அதிக நேரம் ஒதுக்கி வைக்க வேண்டாம்.
4. PCR பெருக்க நிலைமைகள் பொருத்தமானவை அல்ல, மேலும் ப்ரைமர் வரிசை அல்லது செறிவு முறையற்றது.
பரிந்துரை: ப்ரைமர் வரிசையின் சரியான தன்மையை உறுதிப்படுத்தவும் மற்றும் ப்ரைமர் சிதைக்கப்படவில்லை;பெருக்க சமிக்ஞை நன்றாக இல்லை என்றால், அனீலிங் வெப்பநிலையைக் குறைத்து, ப்ரைமரின் செறிவை சரியான முறையில் சரிசெய்ய முயற்சிக்கவும்.
5. PCR அமைப்பு முறையற்றது அல்லது கணினி மிகவும் சிறியது.
பரிந்துரை: PCR எதிர்வினை அமைப்பு மிகவும் சிறியதாக இருப்பதால் கண்டறிதல் துல்லியம் குறையும்.நிகழ்நேர PCR பரிசோதனையை மீண்டும் இயக்க, அளவு PCR கருவியால் பரிந்துரைக்கப்பட்ட எதிர்வினை அமைப்பைப் பயன்படுத்துவது சிறந்தது.