A260/A230 இன் குறைந்த விகிதம் பொதுவாக 230nm இல் அதிகபட்ச உறிஞ்சுதல் அலைநீளத்துடன் கூடிய அசுத்தங்களால் ஏற்படுகிறது.இந்த அசுத்தங்கள் என்னவென்று பார்ப்போம்:

• பொதுவான மாசுபடுத்திகள்	உறிஞ்சுதல் அலைநீளம்	விகித விளைவு
  புரத	~230nm மற்றும் 280nm	A இன் ஒரே நேரத்தில் குறைப்பு260/A 280மற்றும் ஏ260/A 280விகிதங்கள்
  குவானிடின் உப்பு	220-240 என்எம்	A ஐக் குறைக்கவும்260/A 280விகிதம்
  பினோல்	~270nm	-
  டிரிசோல்	~230nm மற்றும் 270nm	A ஐக் குறைக்கவும்260/A 280விகிதம்
  EDTA	~230nm	A ஐக் குறைக்கவும்260/A 280விகிதம்
  எத்தனால்	230-240 என்எம்	A ஐக் குறைக்கவும்260/A 280விகிதம்

 
 
 
பொதுவான மாசுபடுத்திகளின் உறிஞ்சுதல் அலைநீளம் மற்றும் மாறுபாடு மதிப்பு

Pரோட்டின் மாசுபாடு
புரோட்டீன் மாசுபாடு நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் செயல்பாட்டில் மிகவும் பொதுவான மாசுபாடு என்று கருதலாம்.மேல் நீர்நிலை மற்றும் கீழ் பகுதிக்கு இடையில் புரதம் உள்ளதுகரிமகட்டம் .மாசுபாடு ஒரே நேரத்தில் A260/A280 மற்றும் A260/A230 விகிதத்தைக் குறைக்கும், மேலும் A260/A230 விகிதம் A260/A280 விகிதத்தை விட வெளிப்படையாக மாறும்.
அடுத்த காலத்தில்தலைகீழ் படியெடுத்தல்or qPCR எதிர்வினைகள், புரத எச்சங்கள் என்சைம் செயல்பாட்டைத் தடுக்கலாம் அல்லது குறுக்கிடலாம்.புரதம் மாசுபடுவதைத் தவிர்ப்பதற்கான சிறந்த வழி, சூப்பர்நேட்டன்ட்டை உறிஞ்சும் போது "அதிகத்தை விட குறைவாக, ஒரு சிறிய அளவு பல முறை" என்ற கொள்கையை மனதில் வைத்திருப்பதுதான்.

2. குவானிடினியம் மாசுபாடு
ஹைட்ரோகுளோரைடு (GuHCl) மற்றும் குவானிடைன் தியோசயனேட் (GTC) ஆகியவை புரதங்களைக் குறைக்கும் விளைவைக் கொண்டிருக்கின்றன, அவை நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் செயல்பாட்டின் போது செல் சவ்வுகளை விரைவாக அழித்து, புரதக் குறைப்பு மற்றும் மழைப்பொழிவை ஏற்படுத்துகின்றன.GuHCl மற்றும் GTC இன் உறிஞ்சுதல் அலைநீளம் 220-240 nm, மற்றும்மீதமுள்ள குவானிடினியம் உப்பு A260/A230 விகிதத்தைக் குறைக்கும்.எஞ்சியிருக்கும் குவானிடினியம் உப்பு விகிதத்தைக் குறைக்கும் என்றாலும்,கீழ்நிலை சோதனைகள் மீதான தாக்கம் உண்மையில் மிகக் குறைவு.

3. டிரிசோல் மாசுபாடு
டிரிசோலின் முக்கிய கூறு பீனால் ஆகும்.பீனாலின் முக்கிய செயல்பாடு செல்களை லைஸ் செய்வது மற்றும் உயிரணுக்களில் உள்ள புரதங்கள் மற்றும் நியூக்ளிக் அமில பொருட்களை வெளியிடுவதாகும்.ஃபீனால் புரதங்களை திறம்பட குறைக்க முடியும் என்றாலும், அது RNase செயல்பாட்டை முழுமையாக தடுக்க முடியாது.எனவே, 8-ஹைட்ராக்ஸிகுயினோலின், குவானிடைன் ஐசோதியோசயனேட், β-மெர்காப்டோஎத்தனால் போன்றவை டிரிஸோலில் சேர்க்கப்படுகின்றன, அவை உட்புற மற்றும் வெளிப்புற RNase ஐத் தடுக்கின்றன.
செல்லுலார் ஆர்என்ஏவை பிரித்தெடுக்கும் போது, ​​ட்ரைசோல் செல்களை விரைவாக லைஸ் செய்து செல்களில் இருந்து வெளியாகும் நியூக்லீஸைத் தடுக்கும், மேலும் எஞ்சியிருக்கும் ட்ரைசோல் A260/A230 விகிதத்தைக் கணிசமாகக் குறைக்கும்.
செயலாக்க முறை: மையவிலக்கு செய்யும் போது, ​​டிரிசோலில் உள்ள பீனால் 4 டிகிரி மற்றும் அறை வெப்பநிலையின் கீழ் நீர் கட்டத்தில் எளிதில் கரையக்கூடியது என்பதைக் கவனத்தில் கொள்ள வேண்டும்.

4. எத்தனால் எச்சம்
டிஎன்ஏவுடன் பிணைக்கப்படக்கூடிய உப்பு அயனிகளைக் கரைக்கும் போது டிஎன்ஏவைத் துரிதப்படுத்த எத்தனால் இறுதிச் செயல்பாட்டில் பயன்படுத்தப்படுகிறது.அதிகபட்ச உறிஞ்சுதல் அலைநீளம்உறிஞ்சுதல் உச்சம்எத்தனால் 230-240 nm ஆகவும் உள்ளதுA260/A230 என்ற விகிதத்தையும் குறைக்கும்.
எத்தனால் எச்சத்தைத் தவிர்க்கும் முறையை இறுதி நீக்கும் போது இரண்டு முறை மீண்டும் மீண்டும் செய்யலாம்.புகை பேட்டைஇரண்டு நிமிடங்களுக்கு எத்தனால் முழுவதுமாக ஆவியாகி நீக்குவதற்கு இடையகத்தைச் சேர்ப்பதற்கு முன்.
இருப்பினும், இந்த விகிதம் ஆர்என்ஏ தரத்தின் மதிப்பீட்டுக் குறியீடு மட்டுமே என்பதை அறிய வேண்டும்.மேலே குறிப்பிடப்பட்ட செயல்பாடுகள் கண்டிப்பாக ஒழுங்குபடுத்தப்பட்டால், விகிதத்திற்கும் நிலையான வரம்பிற்கும் இடையிலான விலகல் கீழ்நிலை சோதனைகளில் பெரிய தாக்கத்தை ஏற்படுத்தாது.
தொடர்புடைய தயாரிப்புகள்:
விலங்கு மொத்த ஆர்என்ஏ தனிமைப்படுத்தல் கிட்
தாவர மொத்த RNA ஐசோலேஷன் கிட்
செல் மொத்த RNA ஐசோலேஷன் கிட்
தாவர மொத்த RNA ஐசோலேஷன் கிட் பிளஸ்