Escherichia Coli O157: H7 நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் கருவி (PCR ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வு முறை/லியோபிலைசேஷன்)
கிட் விளக்கம்:
பூனை எண்.FP103
இது உணவு, தீவனம், நீர் மாதிரிகள் மற்றும் சுற்றுச்சூழல் மாதிரிகள் ஆகியவற்றில் E. coli O157:H7 ஐ விரைவாகக் கண்டறிந்து ஸ்கிரீனிங் செய்யப் பயன்படுகிறது.
விளக்கங்கள்
இது பயன்படுத்தப்படுகிறதுஉணவு, தீவனம், நீர் மாதிரிகள் மற்றும் சுற்றுச்சூழல் மாதிரிகள் ஆகியவற்றில் E. coli O157:H7 இன் விரைவான கண்டறிதல் மற்றும் ஸ்கிரீனிங்.
[சோதனை கொள்கை]
ஃப்ளோரசன்ட் PCR தொழில்நுட்பத்தின் கொள்கையின்படி, குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள் மற்றும் Taqman ஆய்வுகள் Escherichia coli O157: H7 இன் குறிப்பிட்ட மரபணுவுக்காக வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளன, மேலும் Escherichia coli O157: H7 டிஎன்ஏவின் தரமான கண்டறிதலைக் கண்டறிவதற்காக ஒளிரும் PCR கருவி மூலம் கண்டறியப்பட்டது.
கிட் உள்ளடக்கங்கள்
குறிப்பு: ROX சேனல் ஆய்வு சேர்க்கப்படவில்லை.
| Cஎதிர்ப்பாளர்கள் | விவரக்குறிப்பு | Qதேவையற்ற தன்மை |
| பஃபர் ஏ | குழாய் | 1 |
| பஃபர் பி | குழாய் | 1 |
| நேர்மறை கட்டுப்பாடு | குழாய் | 1 |
| எதிர்மறை கட்டுப்பாடு | குழாய் | 1 |
எதிர்பார்க்கப்படும் பயன்பாடு
இது பயன்படுத்தப்படுகிறது உணவு, தீவனம், நீர் மாதிரிகள் மற்றும் சுற்றுச்சூழல் மாதிரிகள் ஆகியவற்றில் E. coli O157:H7 இன் விரைவான கண்டறிதல் மற்றும் ஸ்கிரீனிங்.
சேமிப்பக நிபந்தனைகள் மற்றும் காலாவதி தேதி
இருட்டில் -20℃ இல் சேமித்து, மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் உருகுவதைத் தவிர்க்கவும்.
செல்லுபடியாகும் காலம் 12 ஆகும்மாதங்கள், மற்றும் உற்பத்தி தேதி வெளிப்புற பேக்கேஜிங்கில் காட்டப்பட்டுள்ளது.
கருவிகள் மற்றும் நுகர்பொருட்கள்
ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR கருவி, பைப்பேட் துப்பாக்கி மற்றும் பொருந்தக்கூடிய குறிப்புகள், சுழல் ஷேக்கர், மினி மையவிலக்கு.
பயன்பாடு
1. மாதிரி செயலாக்கம்
1.1 மாதிரி வகை: இந்த கிட் உணவு, தீவனம், தண்ணீர் மாதிரிகள் மற்றும் Escherichia coli O157:H7 ஆல் மாசுபட்டதாக சந்தேகிக்கப்படும் மற்ற மாதிரிகளுக்கு ஏற்றது.ஆழமாக பதப்படுத்தப்பட்ட இறைச்சி பொருட்கள், பானங்கள் மற்றும் நிறமிகளைக் கொண்ட பிற பொருட்களுக்கு, ஒளிரும் சமிக்ஞை சேகரிப்பை பாதிக்காமல் இருக்க, அவை துவைக்கப்பட வேண்டும்.
1.2 மாதிரிச் செயலாக்கம்: "ஜிபி 4789.10-2016 உணவுப் பாதுகாப்பு தேசிய தரநிலை உணவு நுண்ணுயிரியல் ஆய்வு: எசெரிச்சியா கோலி O157: H7 சோதனை" ஐப் பார்க்கவும், மாதிரி தயாரித்தல், செறிவூட்டல் கலாச்சாரம் மற்றும் Escherichia coli O157: H7.
- Nயூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல்
1.5 மில்லி மையவிலக்குக் குழாயில் 20 மில்லி செறிவூட்டல் கரைசலை எடுத்து, 200 μL நுண்ணுயிர் லைசேட் (கூடுதல் கிட் தேவை), 30 விநாடிகளுக்கு சுழல், சுருக்கமாக மையவிலக்கு செய்து, ஒதுக்கி வைக்கவும்.
குறிப்புகள்: லைசேட்டிலிருந்து நியூக்ளிக் அமிலத்தைப் பிரித்தெடுப்பது 10 நிமிடங்களுக்குள் முடிக்கப்பட வேண்டும், மேலும் நீண்ட நேரம் சேமிக்க முடியாது.
3. நியூக்ளிக் அமிலம் பெருக்கம்
3.1 பயன்படுத்த ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR கருவியை இயக்கவும்.
கிட்டில் இருந்து தாங்கல் A மற்றும் Buffer B ஆகியவை, அவற்றை முழுமையாக உருக்கி, சுருக்கமாக மையவிலக்கு.ஒவ்வொரு PCR எதிர்வினைக் குழாயிலும் 18 μL பஃபர் A மற்றும் 2 μL Buffer B ஐச் சேர்க்கவும்.பிசிஆர் எதிர்வினை குழாய்களில் எதிர்மறை கட்டுப்பாடு, பிரித்தெடுக்கப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலம் மற்றும் நேர்மறை கட்டுப்பாடு ஒவ்வொன்றையும் 5 மிலி சேர்த்து, குழாய்களை மூடி, சுருக்கமாக மையவிலக்கு.
3.3 PCR எதிர்வினைக் குழாயை ஒரு ஒளிரும் PCR இயந்திரத்திற்கு மாற்றவும், மேலும் பெருக்கப் பரிசோதனைகளைச் செய்ய பின்வரும் நடைமுறைகளைப் பயன்படுத்தவும்: எதிர்வினை அமைப்புக்கு 25 mL ஐத் தேர்ந்தெடுக்கவும், ஒவ்வொரு சுழற்சிக்கும் 60°C க்கு ஒளிரும் சமிக்ஞைகளைச் சேகரித்து, கண்டறிதல் சேனலுக்கு FAM ஐத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
| படி | நிரல் | சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கை |
| 1 | 37℃ 5 நிமிடம் | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 நிமிடம் | 1 |
| 3 | 95°C 15வி | 4 0 |
| 60℃ 30கள் (ஃப்ளோரசன்ஸை சேகரிக்கவும்) |
சிக்கல்களை பகுப்பாய்வு செய்வதற்கான வழிகாட்டிகள்
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
ஆர்என்ஏவை பிரித்தெடுக்க முடியாது அல்லது நியூக்ளிக் அமிலத்தின் விளைச்சல் குறைவாக உள்ளது
மீட்புத் திறனைப் பாதிக்கும் பல காரணிகள் பொதுவாக உள்ளன, அவை: மாதிரி ஆர்என்ஏ உள்ளடக்கம், செயல்படும் முறை, எலுஷன் வால்யூம் போன்றவை.
பொதுவான காரணங்களின் பகுப்பாய்வு:
1.ஐஸ் குளியல் அல்லது செயல்பாட்டின் போது குறைந்த வெப்பநிலை (4 ° C) மையவிலக்கு.
பரிந்துரை: அறை வெப்பநிலை (15-25 ° C) செயல்பாடு, பனி குளியல் மற்றும் குறைந்த வெப்பநிலை மையவிலக்கு.
2. முறையற்ற மாதிரி சேமிப்பு அல்லது அதிக நேரம் மாதிரி சேமிப்பு.
பரிந்துரை: மாதிரிகளை -80 ° C இல் சேமிக்கவும் அல்லது திரவ நைட்ரஜனில் உறைய வைக்கவும், மேலும் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-கரை பயன்பாட்டைத் தவிர்க்கவும்;ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கு புதிதாக சேகரிக்கப்பட்ட மாதிரிகளைப் பயன்படுத்த முயற்சிக்கவும்.
3.போதிய மாதிரி சிதைவு
பரிந்துரை: மாதிரி மற்றும் வேலை செய்யும் கரைசல் (லீனியர் அக்ரிலாமைடு) நன்கு கலந்து அறை வெப்பநிலையில் (15-25 ° C) 10 நிமிடம் அடைகாக்கப்படுவதை உறுதி செய்யவும்.
4.எலுவென்ட் தவறாக சேர்க்கப்பட்டது
பரிந்துரை: சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையின் மென்படலத்தின் நடுவில் RNase-Free ddH2O சேர்க்கப்பட்டுள்ளதா என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்
5.Buffer viRW2 இல் நீரற்ற எத்தனாலின் முறையற்ற அளவு
பரிந்துரை: தயவுசெய்து வழிமுறைகளைப் பின்பற்றவும், நீரற்ற எத்தனாலின் சரியான அளவை Buffer viRW2 இல் சேர்த்து, கிட்டைப் பயன்படுத்துவதற்கு முன்பு அவற்றை நன்கு கலக்கவும்.
6.முறையற்ற மாதிரி பயன்பாடு.
பரிந்துரை: 500μl பஃபர் viRLக்கு 200µl மாதிரி.அதிகப்படியான மாதிரி அளவு RNA பிரித்தெடுக்கும் விகிதத்தை குறைக்கும்.
7.முறையற்ற எலுஷன் அளவு அல்லது முழுமையற்ற வெளியேற்றம்.
பரிந்துரை: சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையின் எலுவென்ட் அளவு 30-50μl;நீக்குதல் விளைவு திருப்திகரமாக இல்லை என்றால், முன் சூடேற்றப்பட்ட RNase-Free ddH ஐ சேர்க்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது2O மற்றும் 5-10min போன்ற அறை வெப்பநிலையில் வைக்கும் நேரத்தை நீட்டிக்கவும்
8.சுத்திகரிப்பு பத்தியில் பஃபர் viRW2ல் கழுவிய பின் எத்தனால் எச்சம் உள்ளது.
பரிந்துரை: Buffer viRW2 மற்றும் வெற்று குழாய் மையவிலக்கு 2 நிமிடங்களில் கழுவிய பிறகும் எத்தனால் இன்னும் இருந்தால், மீதமுள்ள எத்தனாலை முழுவதுமாக அகற்ற, சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையை அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்களுக்கு வெற்று-குழாய் மையவிலக்குக்கு விடலாம்.
சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ மூலக்கூறுகளின் சிதைவு
சுத்திகரிக்கப்பட்ட RNA இன் தரமானது மாதிரி சேமிப்பு, RNase மாசுபாடு மற்றும் செயல்பாடு போன்ற காரணிகளுடன் தொடர்புடையது.
பொதுவான காரணங்களின் பகுப்பாய்வு:
1. சேகரிக்கப்பட்ட மாதிரிகள் சரியான நேரத்தில் சேமிக்கப்படவில்லை.
பரிந்துரை: சேகரிப்புக்குப் பிறகு சரியான நேரத்தில் மாதிரி பயன்படுத்தப்படாவிட்டால், உடனடியாக அதை -80 ℃ அல்லது திரவ நைட்ரஜனில் சேமிக்கவும்.ஆர்என்ஏ மூலக்கூறுகளைப் பிரித்தெடுக்க, முடிந்தவரை புதிதாக சேகரிக்கப்பட்ட மாதிரிகளைப் பயன்படுத்த முயற்சிக்கவும்.
2. சேகரிக்கப்பட்ட மாதிரிகள் மீண்டும் மீண்டும் உறைந்து கரைந்து கொண்டிருந்தன.
பரிந்துரை: மாதிரி சேகரிப்பு மற்றும் சேமிப்பின் போது மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் கரைவதைத் தவிர்க்கவும் (ஒருமுறைக்கு மேல் இல்லை) இல்லையெனில் நியூக்ளிக் அமிலத்தின் விளைச்சல் குறையும்.
3.RNase அறுவை சிகிச்சை அறையில் அறிமுகப்படுத்தப்பட்டது அல்லது செலவழிப்பு கையுறைகள், முகமூடிகள் போன்றவை அணியப்படவில்லை.
பரிந்துரை: ஆர்.என்.ஏ மூலக்கூறுகளின் பிரித்தெடுத்தல் ஒரு தனி ஆர்.என்.ஏ அறுவை சிகிச்சை அறையில் சிறப்பாகச் செய்யப்படுகிறது, மேலும் சோதனைக்கு முன் சோதனை அட்டவணை சுத்தம் செய்யப்படுகிறது.RNase அறிமுகத்தால் ஏற்படும் RNA சிதைவைத் தவிர்க்க பரிசோதனையின் போது செலவழிக்கக்கூடிய கையுறைகள் மற்றும் முகமூடிகளை அணியுங்கள்.
4.பயன்படுத்தும் போது RNase மூலம் மறுஉருவாக்கம் மாசுபடுகிறது.
பரிந்துரை: தொடர்புடைய சோதனைகளுக்கு புதிய வைரல் ஆர்என்ஏ ஐசோலேஷன் கிட் மூலம் மாற்றவும்.
5. மையவிலக்கு குழாய்கள், குழாய் குறிப்புகள், முதலியவற்றின் RNase மாசுபாடு. பரிந்துரை: மையவிலக்கு குழாய்கள், குழாய் குறிப்புகள் மற்றும் குழாய்கள் அனைத்தும் RNase-இல்லாதவை என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்.
சுத்திகரிக்கப்பட்ட RNA மூலக்கூறுகள் கீழ்நிலை சோதனைகளை பாதித்தன
சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையால் சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ மூலக்கூறுகள் உப்பு அயனிகள் அல்லது புரதங்கள் அதிகமாக இருந்தால் கீழ்நிலை சோதனைகளை பாதிக்கும், அதாவது: தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன், நார்தர்ன் ப்ளாட் போன்றவை.
1.எலுத்தப்பட்ட RNA மூலக்கூறுகளில் மீதமுள்ள உப்பு அயனிகள் உள்ளன.
பரிந்துரை: நீரற்ற எத்தனாலின் சரியான அளவு பஃபர் viRW2 இல் சேர்க்கப்பட்டுள்ளதா என்பதை உறுதிசெய்து, இயக்க வழிமுறைகளில் சரியான மையவிலக்கு வேகத்தின்படி சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையை இரண்டு முறை கழுவவும்.பின்னர் உப்பு அயனிகளின் மாசுபாட்டை மிகப்பெரிய அளவிற்கு அகற்ற மையவிலக்கு செய்யவும்
2. நீக்கப்பட்ட RNA மூலக்கூறுகளில் மீதமுள்ள எத்தனால் உள்ளது
பரிந்துரை: சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசைகள் பஃபர் viRW2 மூலம் துவைக்கப்பட்டுள்ளன என்பதை உறுதிப்படுத்தியவுடன், இயக்க வழிமுறைகளில் மையவிலக்கு வேகத்தின்படி வெற்று-குழாய் மையவிலக்கைச் செய்யவும்.இன்னும் எத்தனால் மீதம் இருந்தால், அதை அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்களுக்கு வெற்று-குழாய் மையவிலக்கு செய்த பிறகு மீதமுள்ள எத்தனாலை அதிக அளவில் அகற்றலாம்.
அறிவுறுத்தல் கையேடுகள்:
வைரல் ஆர்என்ஏ ஐசோலேஷன் கிட் அறிவுறுத்தல் கையேடு
