சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசை அடைக்கப்பட்டுள்ளது

இந்த கருவியில், மரபணு டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தல் செயல்பாட்டில், மையவிலக்கு படி இல்லாமல் மாதிரி நொதி சிதைவு கலவையில் சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசை நேரடியாக உறிஞ்சப்படுகிறது.

பின்வரும் சாத்தியமான காரணங்கள் பின்வருமாறு:

1. திசு மாதிரிகளின் முழுமையற்ற நொதி செரிமானம்.

பரிந்துரை: Foregene Protease இன் மாதிரி செயலாக்க நேரத்தை சரியான முறையில் நீட்டிக்க முடியும் அல்லது 5 நிமிடங்களுக்கு 12,000 rpm (~13,400 × g) இல் மையவிலக்குக்குப் பிறகு சூப்பர்நேட்டன்ட் எடுக்கப்படலாம்.

2. திசு மாதிரிகள் அல்லது பெரிய திசுக்களின் அதிகப்படியான பயன்பாடு.

பரிந்துரை: மாதிரியில் 1 புக்கால் ஸ்வாப்பை விடாமல் இருப்பது நல்லது;மாதிரி மிகவும் பெரியதாக இருந்தால், பஃபர் ST1, ஃபோர்ஜீன் புரோட்டீஸ், பஃபர் ST2 ஆகியவற்றின் அளவை அதிகரிக்கவும்.

3. மாதிரி பாகுத்தன்மை மிக அதிகமாக உள்ளது.

பரிந்துரை: மரபணு DNA பிரித்தெடுப்பதற்கு முன் மாதிரிகளை 10 mM Tris-HCl உடன் சரியான முறையில் நீர்த்தலாம்.

4. இரத்த அட்டையின் துண்டுகள் உறிஞ்சப்பட்டன.

பரிந்துரை: இரத்தப் புள்ளியின் (FTA அட்டை) மரபணு பிரித்தெடுத்தலின் 6-வது படியின் நிலையற்ற மையவிலக்கு நேரத்தை சரியான முறையில் நீட்டிக்க முடியும்.

குறைந்த மகசூல் அல்லது டிஎன்ஏ இல்லை

மாதிரி தோற்றம், மாதிரி சேமிப்பு நிலைகள், மாதிரி தயாரித்தல், கையாளுதல் போன்றவை உட்பட, மரபணு DNA விளைச்சலைப் பாதிக்கும் பல்வேறு காரணிகள் பெரும்பாலும் உள்ளன.

பிரித்தெடுக்கும் போது மரபணு DNA பெற முடியாது

சாத்தியமான காரணங்கள் பின்வருமாறு:

1. மாதிரிகளை முறையற்ற முறையில் பாதுகாத்தல் அல்லது நீண்ட நேரம் சேமிப்பது மரபணு டிஎன்ஏ சிதைவுக்கு வழிவகுக்கிறது.

பரிந்துரை: வாய்வழி ஸ்வாப்கள் புதிதாக மாதிரி எடுக்கப்பட வேண்டும், மேலும் மரபணு டிஎன்ஏ பிரித்தெடுக்கும் நடவடிக்கைகளுக்குப் பாதுகாக்கப்பட்ட ஸ்வாப்களைப் பயன்படுத்துவது நல்லதல்ல;இரத்த புள்ளி மாதிரிகள் தரம் தகுதியானதா என்பதை உறுதி செய்ய வேண்டும் மற்றும் சேமிப்பு நேரம் மிக நீண்டதாக இருக்கக்கூடாது.

2. மிகக் குறைந்த திசுப் பயன்பாடு தொடர்புடைய மரபணு DNA பிரித்தெடுக்கப்படாமல் போகலாம்.

பரிந்துரை: ஆபரேஷன் வழிகாட்டியில் உள்ள புக்கால் ஸ்வாப் மாதிரி வழிமுறைகளைப் பின்பற்றி, முடிந்தவரை பல முறை துடைக்கவும், இதனால் ஜீனோமிக் டிஎன்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்காக வாய்வழி ஸ்வாப்பில் போதுமான செல்கள் இணைக்கப்படும்;இரத்த புள்ளி மாதிரி பிரித்தெடுக்க, இரத்த புள்ளி வெட்டும் பகுதியை சரியான முறையில் அதிகரிக்க முடியும்.

3. Foregene Protease தவறாகப் பாதுகாக்கப்படுகிறது, இதன் விளைவாக அதன் செயல்பாடு அல்லது செயலிழப்பில் குறைவு ஏற்படுகிறது.

பரிந்துரை: Foregene Protease இன் சேமிப்பக நிலைமைகளை உறுதிப்படுத்தவும் அல்லது நொதி வினைக்கான புதிய Foregene Protease உடன் மாற்றவும்.

4. கிட் அல்லது சேமிப்பகத்தின் முறையற்ற பாதுகாப்பு மிக நீண்டது, இதன் விளைவாக கிட்டில் உள்ள சில கூறுகள் தோல்வியடைகின்றன.

பரிந்துரை: தொடர்புடைய நடைமுறைகளுக்கு புதிய புக்கால் ஸ்வாப் டிஎன்ஏ ஐசோலேஷன் கிட் வாங்கவும்.

5. Buffer WB ஆனது முழுமையான எத்தனாலைச் சேர்க்காது.

பரிந்துரை: தாங்கல் WB ஆனது முழுமையான எத்தனாலின் சரியான அளவைச் சேர்க்கிறது என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்.

6. சிலிகான் படத்தில் எலுயன்ட் சரியாக சேர்க்கப்படவில்லை.

பரிந்துரை: சிலிகான் மென்படலத்தின் நடுவில் 65 டிகிரி செல்சியஸ் முன் சூடேற்றப்பட்ட எலுயண்ட் துளிகளைச் சேர்த்து, எலுஷன் செயல்திறனை அதிகரிக்க அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடம் விடவும்.

குறைந்த மகசூல் மரபணு டிஎன்ஏ தனிமைப்படுத்தப்பட்டது

பின்வரும் சாத்தியமான காரணங்கள் பின்வருமாறு:

1. மாதிரிகளை முறையற்ற முறையில் பாதுகாத்தல் அல்லது நீண்ட நேரம் சேமிப்பது மரபணு டிஎன்ஏ சிதைவுக்கு வழிவகுக்கிறது.

பரிந்துரை: வாய்வழி ஸ்வாப்கள் புதிதாக மாதிரி எடுக்கப்படுவது நல்லது, மேலும் பாதுகாக்கப்பட்ட ஸ்வாப்களை மரபணு டிஎன்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்குப் பயன்படுத்தக்கூடாது.

2. திசு மாதிரியின் அளவு மிகவும் சிறியதாக இருந்தால், பிரித்தெடுக்கப்பட்ட மரபணு DNA உள்ளடக்கம் குறைவாக இருக்கும்.

பரிந்துரை: இயக்க வழிகாட்டியில் உள்ள வாய்வழி துடைப்பான் மாதிரி வழிமுறைகளைப் பின்பற்றவும், முடிந்தவரை பல முறை துடைக்கவும், இதனால் மரபணு டிஎன்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கு போதுமான செல்கள் வாய்வழி ஸ்வாப்பில் இணைக்கப்படும்.

3. Foregene Protease தவறாகப் பாதுகாக்கப்படுகிறது, இதன் விளைவாக அதன் செயல்பாடு அல்லது செயலிழப்பில் குறைவு ஏற்படுகிறது.

பரிந்துரை: Foregene Protease இன் சேமிப்பக நிலைமைகளை உறுதிப்படுத்தவும் அல்லது நொதி வினைக்கான புதிய Foregene Protease உடன் மாற்றவும்.

4. நீர்ச்சத்து பிரச்சனைகள்.

பரிந்துரை: நீக்குவதற்கு இடையக EB ஐப் பயன்படுத்தவும்;ddH ஐப் பயன்படுத்தினால்₂O அல்லது மற்ற எலுவெண்டுகள், எலுவேட்டின் pH 7.0-8.5 க்கு இடையில் இருப்பதை உறுதிப்படுத்தவும்.

5. எலுவேட் சரியாக துளியாக சேர்க்கப்படவில்லை.

பரிந்துரை: சிலிகான் மென்படலத்தின் நடுவில் எலுயன்ட் சொட்டுகளைச் சேர்த்து, எலுஷன் செயல்திறனை அதிகரிக்க அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடம் விடவும்.

6. எலுஷன் திரவம் மிகக் குறைவாகக் குவிகிறது.

பரிந்துரை: குறைந்தபட்சம் 15 μlக்குக் குறையாமல், அறிவுறுத்தல்களில் தேவைப்படும் மரபணு டிஎன்ஏ எலுஷனுக்கு எலுயண்ட் பயன்படுத்தவும்.

மரபணு DNA தனிமைப்படுத்தப்பட்ட குறைந்த தூய்மை

குறைந்த மரபணு டிஎன்ஏ தூய்மையானது கீழ்நிலை பரிசோதனைகளின் தோல்வி அல்லது திருப்தியற்ற முடிவுகளுக்கு வழிவகுக்கும், அதாவது: என்சைம்களை வெட்ட முடியாது, PCR ஆர்வத்தின் மரபணு பகுதியைப் பெற முடியாது, முதலியன.

சாத்தியமான காரணங்கள் பின்வருமாறு:

1. ஹீட்டோரோபுரோட்டீன் மாசுபாடு, ஆர்என்ஏ மாசுபாடு.

பகுப்பாய்வு: பஃபர் PW ஐப் பயன்படுத்தி சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசை கழுவப்படவில்லை;பஃபர் PW வாஷ் சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசை சரியான மையவிலக்கு வேகத்தைப் பயன்படுத்தி கழுவப்படவில்லை.

பரிந்துரை: எத்தனாலைச் சேர்ப்பதற்கு முன் சூப்பர்நேட்டண்டில் மழைப்பொழிவு இல்லை என்பதை உறுதிப்படுத்தவும்;அறிவுறுத்தல்களின்படி சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையைக் கழுவுவதை உறுதிப்படுத்திக் கொள்ளுங்கள், மேலும் இந்த படிநிலையைத் தவிர்க்க முடியாது.

2. தூய்மையற்ற அயன் மாசுபாடு.

பகுப்பாய்வு: பஃபர் WB வாஷ் சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசை தவிர்க்கப்பட்டது அல்லது ஒரு முறை மட்டுமே கழுவப்பட்டது, இதன் விளைவாக எஞ்சிய அயனி மாசுபாடு ஏற்பட்டது.

பரிந்துரை: எஞ்சியிருக்கும் அயனிகளை முடிந்தவரை அகற்றுவதற்காக, Buffer WBஐ 2 முறை துவைக்க வேண்டும்.

3. ஆர்என்ஏ என்சைம் மாசுபாடு.

பகுப்பாய்வு: வெளிநாட்டு RNaseகள் தாங்கலில் சேர்க்கப்பட்டன;பஃபர் PW வாஷ் ஆபரேஷன் தவறானது, இதன் விளைவாக RNase எச்சங்கள், கீழ்நிலை RNA சோதனை செயல்பாடுகளை பாதிக்கிறது, அதாவது இன் விட்ரோ டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன்.

பரிந்துரை: ஃபோர்ஜீன் சீரிஸ் நியூக்ளிக் அமிலம் தனிமைப்படுத்தும் கருவிகள் RNase ஐ கூடுதலாக சேர்க்காமல் RNA ஐ அகற்றலாம், இதனால் buccal Swab/FTA கார்டு டிஎன்ஏ ஐசோலேஷன் கிட் RNase ஐ சேர்க்க வேண்டியதில்லை;Buffer PW வாஷிங் சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசைக்கான வழிமுறைகளைப் பின்பற்றுவதை உறுதிப்படுத்திக் கொள்ளுங்கள், மேலும் இந்தப் படிநிலையைத் தவிர்க்க முடியாது.

4. எத்தனால் எச்சம்.

பகுப்பாய்வு: சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையைக் கழுவிய பிறகு, பஃபர் WB வெற்று குழாய் மையவிலக்கைச் செய்யவில்லை.

பரிந்துரை: அறிவுறுத்தல்களின்படி சரியான வெற்று குழாய் மையவிலக்கு செயல்பாட்டைச் செய்யவும்.

5. மற்ற தூய்மையற்ற மாசு.

பகுப்பாய்வு: சேமிக்கப்பட்ட மாதிரிகள் அல்லது சிறப்பு மாதிரிகள் முன்கூட்டியே சிகிச்சையளிக்கப்படவில்லை.

பரிந்துரை: அறிவுறுத்தல்களின்படி மாதிரியை முழுமையாக முன்கூட்டியே கையாளவும்.