RNase என்பது ஒரு முக்கியமான வார்த்தையாகும், இது RNA பிரித்தெடுத்தல் பரிசோதனைகளை அடிக்கடி நடத்தும் பல மாணவர்கள் கேட்க விரும்புவதில்லை.முழுமையாக ஆயுதம் ஏந்திய நிலையில், இறுதியாக அதிக நச்சுத்தன்மை கொண்ட பீனால் மற்றும் குளோரோஃபார்ம் மூலம் பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ சிதைந்தது.நான் சமரசம் செய்யவில்லை!!!இன்று, புகழ்பெற்ற Rnase இன் தோற்றத்தைப் பார்ப்போம்.

Ribonuclease (RNase), அல்லது RNase, RNA ஐ சிறிய மூலக்கூறுகளாக ஹைட்ரோலைஸ் செய்யக்கூடிய ஒரு அணுக்கரு ஆகும்.RNase, ஒரு சிறிய மூலக்கூறு புரதமாக, வழக்கத்திற்கு மாறாக நிலையானது .வழக்கமான உயர் வெப்பநிலை மற்றும் உயர் அழுத்த நீராவி கிருமி நீக்கம் மற்றும் புரத தடுப்பான்கள் அதை முழுமையாக செயலிழக்க செய்ய முடியாது.RNase இன் நிலைத்தன்மை முக்கியமாக கட்டமைப்பில் உள்ள டிஸல்பைட் பிணைப்பிலிருந்து வருகிறது.எடுத்துக்காட்டாக, போவின் கணையத்தின் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் RNase 124 அமினோ அமிலங்களைக் கொண்டுள்ளது, ஆனால் 4 டிஸல்பைட் பிணைப்புகளைக் கொண்டுள்ளது.சல்பர் பிணைப்பு மற்றும் டைசல்பைட் பிணைப்பு RNase சிறந்த வெப்ப நிலைப்புத்தன்மையை அளிக்கிறது.கூடுதலாக, rnase ஒப்பீட்டளவில் சிறிய மூலக்கூறு எடையைக் கொண்டுள்ளது மற்றும் பல சந்தர்ப்பங்களில் அதன் அசல் இணக்கத்தை விரைவாக மீட்டெடுக்க முடியும்.

மிகவும் நிலையானதாக இருப்பதுடன்,RNases ஆய்வகத்தில் எங்கும் காணப்படுகின்றன .RNase என்பது ஒரு உயிரியல் பாதுகாப்பு பொறிமுறையாகும்.ஒரு உயிரணுவிற்கு, வெளிப்புற ஆர்என்ஏ பெரும்பாலும் ஆபத்தானது.வெளிப்புற DNA உடன் ஒப்பிடும்போது, ​​வெளிப்புற RNA பெரும்பாலும் மிகவும் ஆபத்தானது.ஆர்என்ஏ மகிழ்ச்சியுடன் படியெடுக்கப்பட்டு மொழிபெயர்க்கப்படுகிறது, எனவே கிட்டத்தட்ட அனைத்து உயிரினங்களும் வெளிப்புற ஆர்என்ஏவின் படையெடுப்பிற்கு எதிராக பாதுகாக்க RNases ஐ உருவாக்கியுள்ளன.எனவே, ஆய்வகத்தில் பயிரிடப்படும் பாக்டீரியா செல்கள் மற்றும் ஆர்என்ஏவை பிரித்தெடுக்கும் நீங்கள் RNase இன் நறுமணத்தை வெளிப்படுத்துகின்றன.மனித உடல் திரவங்களில் (உமிழ்நீர், கண்ணீர் போன்றவை) அதிக அளவு RNase உள்ளது, எனவே RNA சிதைந்தால் அழாதீர்கள்.நீங்கள் எவ்வளவு அதிகமாக அழுகிறீர்களோ, அவ்வளவு மோசமாக ஆர்என்ஏ சிதைவு!!சகோதரி தய்யு ஆர்என்ஏ எடுப்பதற்கு ஏற்றவர் அல்ல!

கூடுதலாக, உங்கள் மென்மையான தோலில் நிறைய RNase உள்ளது, மேலும் மார்க்கர்கள், பைப்பெட்டுகள், குளிர்சாதனப் பெட்டி கதவுகள் மற்றும் தோலால் தொடப்பட்ட கதவு கைப்பிடிகள் ஆகியவற்றிலும் RNase உள்ளது.

அதிக அலைச்சலுடன், RNases ஐ எவ்வாறு கையாள்வது என்பதைப் பார்ப்போம்.

ஆர்.என்.ஏவை அகற்றும் போது அனைவரும் முதலில் நினைப்பதுDEPC(டைதில் பைரோகார்பனேட்).DEPC முக்கியமாக RNase செயலில் உள்ள ஹிஸ்டைடின் குழுவின் இமிடாசோல் வளையத்துடன் இணைவதன் மூலம் புரதத்தை குறைக்கிறது, இதன் மூலம் நொதியின் செயல்பாட்டைத் தடுக்கிறது.0.1% DEPC ஆனது Rnase இல் சிறந்த அகற்றும் விளைவை ஏற்படுத்தும், ஆனால் DEPC என்பது அறியப்பட்ட புற்றுநோயாகும் என்பதை நாம் கவனிக்க வேண்டும், எனவே அதைப் பயன்படுத்தும் போது சிறப்பு கவனம் செலுத்தப்பட வேண்டும்.

RNase க்கு, நாம் இரண்டு அம்சங்களில் இருந்து தொடங்க வேண்டும்.முதலாவது எண்டோஜெனஸ் RNase இன் செயல்பாட்டைத் தடுப்பதாகும்

டிரிசோலில் உள்ள குவானிடைன் ஐசோதியோசயனேட் மற்றும் டிடிடி போன்ற வழக்கமான ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் வினைகள் RNase இன் டைசல்பைட் பிணைப்பைத் திறக்கலாம், ஆனால் இன்னும் சில RNaseகள் உள்ளன, குறிப்பாக திசு மாதிரிகளில், எனவே குறைந்த வெப்பநிலையில் கவனம் செலுத்துங்கள்.

1.திசு மாதிரியை வெளியே எடுத்தவுடன் திரவ நைட்ரஜனில் அல்லது வணிக ரீதியான ஆர்என்ஏ பாதுகாப்பு கரைசலில் உடனடியாக மூழ்க வைக்கவும்.

2.செல் மாதிரியின் ஆர்என்ஏவை பிரித்தெடுத்த பிறகு, அதை லிசிஸ் கரைசலில் சேர்த்து ஐஸ் பெட்டியில் லைஸ் செய்யவும்.

3. அரைப்பதற்கு திரவ நைட்ரஜனைப் பயன்படுத்துவது சிறந்தது திசு மாதிரிகள் ஒரே மாதிரியாக இருக்கும் போது.திரவ நைட்ரஜன் இல்லாத எலக்ட்ரிக் ஹோமோஜெனிசரைப் பயன்படுத்தும் போது, ​​ஹோமோஜெனேட் அடாப்டரை முழுமையாக முன்கூட்டியே குளிர்விப்பதில் கவனம் செலுத்துங்கள்.

இரண்டாவது வெளிப்புற DNase ஆகும்

1.முழுமையாக ஆயுதம் ஏந்தியிருங்கள், லேப் கோட் அணியுங்கள், முகமூடி அணியுங்கள், மேலும் ஒரு ஜோடி புதிய கையுறைகளை அணிய மறக்காதீர்கள் (அவ்வளவு சிக்கனமாக இருக்காதீர்கள்!! ட்ரைசோல் மிகவும் அரிக்கும் தன்மை கொண்டது, மேலும் இது கையுறைகள் மூலம் மிகவும் வலிமையானது, எனவே உங்கள் கைகளில் சொட்ட வேண்டாம்).

2.பயன்படுத்தப்பட்ட அனைத்து பைப்பெட் டிப்ஸ், EP குழாய்கள், PCR குழாய்கள் மற்றும் பிற உபகரணங்களும் de-RNase சிகிச்சை செய்யப்பட வேண்டும்.இது 0.1% DEPC இல் ஊறவைக்கப்பட்டு, பின்னர் அதிக அழுத்தத்தின் கீழ் அழுத்தப்படும்.ஃப்யூம் ஹூட்டில் செயல்பாட்டில் கவனம் செலுத்துங்கள்.உள்ளூர் கொடுங்கோலர்கள் என்சைம்களை அகற்றுவதற்காக நுகர்பொருட்களை நேரடியாக வாங்கலாம்.

PS: ஒரு சோம்பேறி முறையைச் சொல்கிறேன்.அதிக வெப்பநிலை மற்றும் உயர் அழுத்தம் RNase ஐ முழுமையாக அகற்ற முடியாது என்றாலும், அது அதன் பெரும்பகுதியை அகற்றும்.2 மடங்கு அதிக வெப்பநிலை மற்றும் உயர் அழுத்தம் ஒரு நல்ல விளைவைக் கொண்டிருக்கிறது, மேலும் RNA பிரித்தெடுத்தல் சிறிய விளைவைக் கொண்டிருக்கிறது.

3.ஆல்கஹால் புரதங்களை சிதைக்கும்,எனவே RNA பிரித்தெடுத்தல் அட்டவணையை 75% ஆல்கஹால் கொண்டு துடைக்க முடியும் , மற்றும் கையுறைகள் கூட ஆல்கஹால் தெளிக்கப்படலாம்.

4.இறுதி ஆர்என்ஏ கரைக்கும் கரைசல் மற்றும் மையவிலக்கு குழாய் ஆகியவையும் டி-ஆர்நேஸ் சிகிச்சை செய்யப்பட வேண்டும்.DEPC நீர் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் RNA கரைக்கும் கரைசல் ஆகும்.DEPC நீரின் சரியான தயாரிப்பு முறையைப் பற்றி பேசலாம் (நீங்கள் அதை வாங்கும் போது வணிக DEPC ஐ மீண்டும் பேக்கேஜ் செய்ய நினைவில் கொள்ளுங்கள்)

1:1000 இல் DEPC ஐ அல்ட்ராப்பூர் தண்ணீரில் சேர்த்து, நன்றாக குலுக்கி, 37 ° C இல் ஒரே இரவில் நிற்கவும், மேலும் 15 நிமிடங்களுக்கு அதிக வெப்பநிலை மற்றும் அதிக அழுத்தத்தின் கீழ் 121 ° C இல் கிருமி நீக்கம் செய்யவும்.DEPC தண்ணீரை 1ml அலிகோட்களில் -20°C இல் சேமிக்கலாம்.

இறுதியாக, சுருக்கமாக: குறைந்த வெப்பநிலை முக்கியமானது, நுகர்பொருட்கள் நன்கு கையாளப்படுகின்றன, முழுமையாக ஆயுதம் மற்றும் குறைவான பேச்சு!

சரி, இன்றைய உத்தி அவ்வளவுதான்.நீங்கள் குறிப்பிட்டுள்ள அனைத்து ஆர்என்ஏ செறிவு மற்றும் தூய்மையை நான் விரும்புகிறேன்.A260/A280 இரண்டும் 2.0!!!

நிச்சயமாக, நீங்கள் ஒரு பயன்படுத்தினால்அறை வெப்பநிலை செயல்பாடு ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் கருவி, மேலே உள்ள பிரச்சனைகளை நீங்கள் சந்திக்காமல் இருக்கலாம்.

அறை வெப்பநிலையில் செயல்படும் போது, ​​DNase ஐ சேர்க்காமல், 11 நிமிடங்களில் செல்களில் இருந்து மொத்த RNA ஐ பிரித்தெடுக்கிறது, மேலும் 30 நிமிடங்களில் விலங்கு திசுக்கள் அல்லது தாவரங்களில் இருந்து மொத்த RNA ஐ பிரித்தெடுக்கிறது.

சோதனை மாதிரிகளுக்கு, தொடர்பு கொள்ளவும்:overseas@foregene.com

தொடர்புடைய தயாரிப்புகள்:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/