பசை மீட்டெடுப்பை மேம்படுத்துவதற்கான உதவிக்குறிப்புகள்

1. எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் போது மாதிரி சுமையை அதிகரிக்கவும்.

2. புதிதாக தயாரிக்கப்பட்ட எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் பஃப்பரைப் பயன்படுத்தவும்.

3. பசை வெட்டும்போது, ​​பசை வெட்டுவதன் அளவைக் குறைக்க கீற்றுகளுடன் பசையை மட்டும் வெட்ட முயற்சிக்கவும்: சில நோக்கத் துண்டுகளுடன் பசை தேவையில்லை, இல்லையெனில் அது மீட்பு விகிதத்தை பாதிக்கும்.

4. இரண்டு அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட பசை துண்டுகள் உருகிய பிறகு, ஒரு குழாயைப் பயன்படுத்தி, எவ்வளவு பெரிய தொகுதியாக இருந்தாலும், அதை அதே நெடுவரிசைக்கு மாற்றவும்.

5. சோலில் சேர்க்கப்படும் கரைசல் இன்னும் கொஞ்சம் அதிகமாக இருக்கலாம், இது டிஎன்ஏவை சவ்வுடன் பிணைக்க மிகவும் உகந்தது, ஆனால் பொதுவாக 750ul ஐ விட அதிகமாக இருக்காது.

6. ஜெல் மீட்புக்கான திறவுகோல், பத்தியில் உள்ள கரைசலின் உப்பு செறிவு, அமிலத்தன்மை (கட்டணம்) மற்றும் ஹைட்ரோபோபசிட்டி மூலம் பத்தியில் டிஎன்ஏவை பிணைப்பதாகும்.எனவே, எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் பஃப்பரின் pH அதிகமாக இருந்தால், 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) ஐ சோலில் சேர்க்கலாம்;மென்படலத்தில் DNA மூலக்கூறுகளை நன்றாக குறுக்கிட, 30% ஐசோப்ரோபனோலை பசையை கரைத்த பிறகு திரவத்தில் சூடாக்க சேர்க்கலாம்.

7. எலுயண்ட்டைச் சேர்ப்பதற்கு முன், எத்தனாலை முழுவதுமாக ஆவியாக்குவதற்கு அறை வெப்பநிலையில் ஒரு சில நிமிடங்கள் (சுமார் 10 நிமிடங்கள்) நெடுவரிசையை விடவும்.

8. இறுதியாக, மீட்டெடுப்பின் அளவைக் குறைக்க குறைந்த எலுவென்ட்டைச் சேர்க்கவும்.பொதுவாக, 30-50μl எலுயன்ட் எலுஷனுக்குப் பயன்படுத்தப்படுகிறது (மிகக் குறைவாக இல்லை, இல்லையெனில் அது மென்படலத்தை ஈரப்படுத்த முடியாது, இது எலுஷனுக்கு உகந்ததல்ல);எலுஷன் துளிகள் மென்படலத்தின் மையத்தில் உள்ளன, சவ்வுடன் பிணைக்கப்பட்ட டிஎன்ஏவை முழுமையாக நீக்குகிறது.

9. எலுவென்ட்டைச் சேர்த்த பிறகு, அதை 5 நிமிடங்களுக்கு 55 டிகிரி தண்ணீர் குளியலில் நீக்கலாம் அல்லது 10 நிமிடங்களுக்கு மேல் 50 டிகிரி தண்ணீர் குளியலில் வைக்கலாம் அல்லது பாராஃபில்ம் மூலம் ஒரே இரவில் 4 டிகிரியில் அடைத்து, மறுநாள் மீட்புக்கு மையவிலக்கு செய்யப்பட்டால், விளைவு நன்றாக இருக்கும்.

10.சென்ட்ரிஃப்யூஜ் எலுவேட்டை மீண்டும் உறிஞ்சுதல் நெடுவரிசையில் சேர்த்து மீண்டும் மையவிலக்கு.

PCR தயாரிப்பு மீட்புக்கான விரிவான முறைகள் மற்றும் நடைமுறைகள்

1. சாதாரண ரப்பர் மறுசுழற்சி

நீங்கள் பசை மீட்டெடுக்க விரும்பினால், ஒரு கிட் பயன்படுத்த சிறந்தது, இது வசதியானது மற்றும் சற்று அதிக மீட்பு விகிதம் உள்ளது.நீங்கள் உண்மையிலேயே அதை கைமுறையாக மீட்டெடுக்க வேண்டும் என்றால், பசையை வெட்டிய பிறகு TE இன் அளவை 3 மடங்கு சேர்க்கலாம்.தண்ணீர் குளியலில் உருகிய பிறகு, பீனால், ஃபீனால்/குளோரோஃபார்ம் சுத்தமாக பிரித்தெடுக்கப்பட்டு, எத்தனால் வீழ்படிவு செய்யப்படுகிறது.அவ்வளவுதான்.

2. குறைந்த உருகும் புள்ளி ஜெல்களிலிருந்து டிஎன்ஏ மீட்பு

டிஎன்ஏ துண்டுகளின் சுத்திகரிப்பு ஜெல்லின் அளவிற்கு சமமான TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) ஐச் சேர்த்து, ஜெல்லை முழுமையாகக் கரைக்க 5 நிமிடங்களுக்கு 65°C தண்ணீர் குளியலில் வைக்கவும்.

அறை வெப்பநிலைக்குக் கொண்டு வரப்பட்ட பிறகு, சம அளவு ஃபீனால் (TE, TE உடன் நிறைவுற்ற மேல் அடுக்கில் சீல் வைக்கப்பட்டு, பீனாலின் கீழ் அடுக்கு அகற்றப்பட்டது) சேர்க்கப்பட்டு, கலவை மெதுவாகக் கலக்கப்பட்டது (கலவை தேவையில்லை), 12,000 ஆர்பிஎம்மில் 3 நிமிடங்களுக்கு மையவிலக்கு செய்யப்பட்டது.1-2 முறை செய்யவும்.

சூப்பர்நேட்டன்ட்டை எடுத்து, 0.1 அளவு 3mol/L சோடியம் அசிடேட் (pH 5.2) மற்றும் 2.5 மடங்கு அளவு எத்தனாலைச் சேர்த்து எத்தனால் மழைப்பொழிவை மேற்கொள்ளவும்.சுத்திகரிக்கப்பட்ட டிஎன்ஏவை சரியான அளவு TE உடன் கரைத்து, உள்ளடக்கத்தை அளந்து, பயன்பாட்டிற்கு தயார் செய்யுங்கள் (இதை இலக்கு மரபணு அமைப்பு பகுப்பாய்வு, ஆய்வு தயாரித்தல் போன்றவற்றுக்கு பயன்படுத்தலாம்).

3. நல்ல பெருக்க விவரக்குறிப்புடன் PCR மீட்பு

PCR பெருக்கத்தின் தனித்தன்மை நன்றாக இருந்தால், அது PCR தயாரிப்பின் எளிய சுத்திகரிப்பு மற்றும் மீட்பு.நீங்கள் PCR தயாரிப்பில் 50ug/ml புரோட்டினேஸ் கே சேர்க்கலாம், 1 மணிநேரத்திற்கு 37 டிகிரி, ஃபீனால்/குளோரோஃபார்ம் மூலம் ஒரு முறை பிரித்தெடுக்கலாம், குளோரோஃபார்மில் ஒரு முறை பிரித்தெடுக்கலாம், மேலும் 0.1 வால்யூம் சூப்பர்நேட்டன்ட் சேர்க்கலாம்.சோடியம் அசிடேட் 2.5 தொகுதி முழுமையான எத்தனாலுடன் மழைப்பொழிவு மூலம் மீட்கப்பட்டது.

தொடர்புடைய தயாரிப்புகள்:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/