சமீபத்தில், நான் ஆச்சரியமான ஒன்றைக் கண்டுபிடித்தேன்!அவரைச் சுற்றியுள்ள பல மேம்பட்ட பரிசோதனை நிபுணர்களுக்கு சில அடிப்படை பரிசோதனை அறிவுப் புள்ளிகள் கூட தெரியாது.

உதாரணமாக, பின்வரும் கேள்விகளுக்கு உங்களால் பதிலளிக்க முடியுமா?

OD260 மற்றும் A260 இடையே வேறுபாடு உள்ளதா?ஒவ்வொன்றும் என்ன அர்த்தம்?
OD என்பது ஆப்டிகல் அடர்த்தியின் சுருக்கம் (ஆப்டிகல் டென்சிட்டி), A என்பது உறிஞ்சுதல் (உறிஞ்சுதல்) என்பதன் சுருக்கம், இரண்டு கருத்துக்களும் உண்மையில் ஒன்றுதான், "ஆப்டிகல் டென்சிட்டி" என்பது "உறிஞ்சுதல்", ஆனால் "ஆப்டிகல் அடர்த்தி" என்பது பெரும்பாலான தேசிய தரநிலைகளுக்கு ஏற்ப உள்ளது மற்றும் மேலும் தரப்படுத்தப்பட்டது.

நியூக்ளிக் அமில செறிவைக் கணக்கிட பொதுவாக OD மதிப்பை 260nm இல் அளவிடுகிறோம், எனவே 1OD எதைக் குறிக்கிறது?
நியூக்ளிக் அமிலம் 260nm அலைநீளத்தில் அதிகபட்ச உறிஞ்சுதல் உச்சத்தை கொண்டுள்ளது, இதில் DNA மற்றும் RNA இரண்டையும் கொண்டுள்ளது, அத்துடன் துண்டு துண்டான நியூக்ளிக் அமிலத் துண்டுகள் (இது முக்கிய புள்ளி).
260 nm அலைநீளத்தில் அளவிடப்பட்ட OD மதிப்பு OD260 ஆக பதிவு செய்யப்பட்டது.மாதிரி சுத்தமாக இருந்தால், OD260 மதிப்பு நியூக்ளிக் அமில மாதிரியின் செறிவைக் கணக்கிடலாம்.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (இரட்டை இழை DNA)
=37 μg/ml ssDNA (ஒற்றை இழை DNA)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகள்)
RT-PCR, Realtime-PCR மற்றும் QPCR ஆகியவற்றுக்கு இடையே ஏதேனும் தொடர்பு மற்றும் வேறுபாடு உள்ளதா?
RT-PCR என்பது தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் PCR என்பதன் சுருக்கமாகும்
Real Time PCR=qPCR, Quantitative Real Time PCR என்பதன் சுருக்கம்
ரியல் டைம் பிசிஆர் (நிகழ்நேர ஃப்ளோரசன்ட் குவாண்டிடேடிவ் பிசிஆர்) மற்றும் ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் பிசிஆர் (ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் பிசிஆர்) இரண்டும் ஆர்டி-பிசிஆர் என சுருக்கமாகத் தோன்றினாலும்.ஆனால் சர்வதேச மாநாடு: ஆர்டி-பிசிஆர் குறிப்பாக ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் பிசிஆரைக் குறிக்கிறது.

உயிரியலில் டிஎன்ஏ/ஆர்என்ஏ நீளத்தை விவரிக்க பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் என்டி, பிபி மற்றும் கேபி என்ன?
nt = நியூக்ளியோடைடு
bp = அடிப்படை ஜோடி அடிப்படை ஜோடி
kb = கிலோபேஸ்

நிச்சயமாக, பலர் இந்த சிறிய விவரங்களைப் பற்றி கவலைப்படுவதில்லை என்று நீங்கள் கூறுவீர்கள்!எல்லோரும் இதைச் செய்கிறார்கள், அது என்னவென்று யாரும் உங்களிடம் கேட்க மாட்டார்கள்.இது தேவையற்றது என்று உங்களுக்குத் தெரியும், இல்லையா?

இல்லை, இல்லை, இதைத் தெரிந்து கொள்வது மிகவும் அவசியம்!எதன் காரணமாக?
நீங்கள் ஒரு கட்டுரையை இடுகையிட விரும்புவதால்!சகோதரன்!நீங்கள் பட்டப்படிப்பை இலக்காகக் கொண்டாலும் அல்லது அறிவியல் ஆராய்ச்சி சாதனைகளைப் பின்தொடர்பவராக இருந்தாலும், நீங்கள் பேசுவதற்கு கட்டுரைகளை நம்பியிருக்க வேண்டும்!

நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் எளிமையான மற்றும் மிக அடிப்படையான பரிசோதனையாக இருக்க வேண்டும்.நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தலின் தரம் நேரடியாக அடுத்தடுத்த சோதனைகளின் முடிவுகளை தீர்மானிக்கிறது.

பலமுறை சொன்னாலும் பொருட்படுத்தாத நண்பர்கள் பலர் இருக்கிறார்கள்.இந்த முறை நான் கட்டுரையிலிருந்து வெளியேற முடிவு செய்தேன்!

MIQE என குறிப்பிடப்படும் அளவு நிகழ்நேர PCR பரிசோதனைகளை வெளியிடுவதற்கான குறைந்தபட்ச தகவல், ஃப்ளோரசன்ஸ் அளவு பரிசோதனை வழிகாட்டுதல்களின் தொகுப்பாகும்.பரிசோதகரால் வழங்கப்பட்ட சோதனை நிலைமைகள் மற்றும் பகுப்பாய்வு முறைகள் மூலம், மதிப்பாய்வாளர்கள் ஆய்வாளரின் சோதனைத் திட்டத்தின் செல்லுபடியை சிறப்பாக மதிப்பிட முடியும்.

நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் பிரிவில், பின்வரும் கண்டறிதல் உருப்படிகள் முன்மொழியப்பட்டிருப்பதைக் காணலாம்,

"E" என்பது வழங்கப்பட வேண்டிய தகவலைக் குறிக்கிறது மற்றும் "D" என்பது தேவைப்பட்டால் வழங்கப்பட வேண்டிய தகவலைக் குறிக்கிறது.

வடிவம் மிகவும் சிக்கலானது, உண்மையில், எல்லோரும் தொடங்க வேண்டும் என்று நான் சொல்ல விரும்புகிறேன்

தூய்மை (D), மகசூல் (D), ஒருமைப்பாடு (E) மற்றும் நிலைத்தன்மை (E) இந்த நான்கு அம்சங்களில் நியூக்ளிக் அமிலங்களை மதிப்பிடுவதற்கு.

சோதனை பழக்கவழக்கங்களின்படி, தூய்மை மற்றும் செறிவு ஆகியவற்றின் மதிப்பீட்டு முறைகளைப் பற்றி முதலில் பேசுங்கள்.

OD அளவீடு என்பது பரிசோதனையாளர்களுக்கு பிடித்தமான மற்றும் எளிதான கண்டறிதல் முறையாகும்.கொள்கையைப் பொறுத்தவரை, நான் இங்கே விவரங்களுக்கு செல்ல மாட்டேன்.பல ஆய்வகங்கள் இப்போது நியூக்ளிக் அமில மாதிரிகளை நேரடியாக அளவு பகுப்பாய்வு செய்ய அல்ட்ரா-மைக்ரோ ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டர்களைப் பயன்படுத்துகின்றன.உறிஞ்சும் மதிப்பைக் காண்பிக்கும் போது, ​​நிரல் நேரடியாக செறிவு மதிப்பு (நியூக்ளிக் அமிலம், புரதம் மற்றும் ஃப்ளோரசன்ட் சாயம்) மற்றும் தொடர்புடைய விகிதங்களை வழங்குகிறது.OD மதிப்பின் பகுப்பாய்வைப் பொறுத்தவரை, இந்தப் படத்தைச் சேமிக்கவும், நீங்கள் நன்றாக இருப்பீர்கள்.

யுனிவர்சல் OD மதிப்பு தீர்வு பட்டியல்

இருப்பினும், உங்களுக்காக தனித்தனியாக கொண்டு வர வேண்டிய சில எச்சரிக்கைகள் உள்ளன.

(எல்லாவற்றிற்கும் மேலாக, நீங்கள் சேமிக்கும் மற்றும் உங்களுக்குத் தேவைப்படும் வரை காத்திருப்பவர்களாக இருக்க வேண்டும் என்று எனக்குத் தெரியும்!)

குறிப்பு 1 உபகரணங்கள்

வெவ்வேறு உபகரணங்களால் OD மதிப்பு பாதிக்கப்படும்.OD260 ஒரு குறிப்பிட்ட வரம்பிற்குள் இருக்கும் வரை, OD230 மற்றும் OD280 மதிப்புகள் அர்த்தமுள்ளதாக இருக்கும்.எடுத்துக்காட்டாக, 260nm இல் பொதுவான Eppendorf D30 இன் உறிஞ்சுதல் வரம்பு 0~3A ஆகும், மேலும் NanoDrop One of Thermo 260nm ஆக உள்ளது.உறிஞ்சுதல் வரம்பு 0.5~62.5A.

குறிப்பு 2நீர்த்த வினைப்பொருள்

OD மதிப்பானது வெவ்வேறு உலைகளின் நீர்த்தத்தால் பாதிக்கப்படலாம்.எடுத்துக்காட்டாக, pH இல் சுத்திகரிக்கப்பட்ட RNA இன் OD260/280 வாசிப்பு7.5 10மி.மீ டிரிஸ்இடையகமானது 1.9-2.1 க்கு இடையில் உள்ளதுநடுநிலை நீர் தீர்வுவிகிதம் குறைவாக இருக்கும், ஒருவேளை 1.8-2.0 மட்டுமே, ஆனால் இது RNA இன் தரம் வித்தியாசத்தை மாற்றுகிறது என்று அர்த்தமல்ல.

குறிப்பு 3எஞ்சிய பொருட்கள்

மீதமுள்ள பொருட்களின் இருப்பு நியூக்ளிக் அமில செறிவு அளவீட்டின் துல்லியத்தை பாதிக்கும், எனவே நியூக்ளிக் அமில மாதிரிகளில் புரதம், பீனால், பாலிசாக்கரைடு மற்றும் பாலிபினால் எச்சங்களை முடிந்தவரை தவிர்க்க வேண்டியது அவசியம்.

இருப்பினும், உண்மையில், கரிம உலைகளுடன் பிரித்தெடுத்தல் ஒரு பழைய முறையாகும்.வணிகக் கருவிகளில், பிரித்தெடுத்தல் விளைவை சிலிக்கா அடிப்படையிலான உறிஞ்சுதல் நிரலை மையவிலக்கத்துடன் இணைக்கலாம், அகற்ற கடினமாக இருக்கும் நச்சு மற்றும் தீங்கு விளைவிக்கும் கரிம வினைகளைத் தவிர்ப்பது போன்றவை. சிக்கல், போன்றForegene இன் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் கருவி, DNase/RNase மற்றும் நச்சு கரிம வினைகளை செயல்பாடு முழுவதும் பயன்படுத்தாது, வேகமாகவும் பாதுகாப்பாகவும் உள்ளது, மற்றும் இந்தவிளைவு ஆகும்நல்ல(தற்செயலாக அது வழுக்கை என்று கூறினார், ஆனால் நீங்கள் தெரிந்து கொள்ள வேண்டும் என்று எனக்குத் தெரியும்).

எடுத்துக்காட்டு 1: மரபணு DNA பிரித்தெடுத்தல் விளைச்சல் மற்றும் தூய்மை

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) பல்வேறு ஆதாரங்களில் இருந்து மண் மாதிரிகளை நடத்துகிறது, மேலும் பெறப்பட்ட மரபணு DNAவின் அளவு மற்றும் தூய்மை பின்வரும் அட்டவணையில் காட்டப்பட்டுள்ளது:
எடுத்துக்காட்டு 2: திசு ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் மகசூல் மற்றும் தூய்மை

அனிமல் டோட்டல் ஆர்என்ஏ ஐசோலேஷன் கிட் (RE-03012) பல்வேறு திசு மாதிரிகளை செயலாக்கியது, மேலும் பெறப்பட்ட ஆர்என்ஏவின் அளவு மற்றும் தூய்மை கீழே உள்ள அட்டவணையில் காட்டப்பட்டுள்ளது (சுட்டி திசுக்களுக்கு):
இருப்பினும், நீங்கள் OD மதிப்பை முடித்துவிட்டீர்கள் என்று நினைக்க வேண்டாம்.முன்பக்கத்தில் நான் உங்களுக்காக வரைந்த முக்கிய புள்ளிகளை நீங்கள் கவனிக்கிறீர்களா?

கவனிக்கவும்

துண்டாக்கப்பட்ட நியூக்ளிக் அமில மூலக்கூறுகளும் உறிஞ்சுதலில் கணக்கிடப்படும்.ஆர்என்ஏவில் மரபணு டிஎன்ஏ எச்சங்கள் இருப்பதாகக் கருதினால், உங்கள் ஓடி மதிப்பு மிக அதிகமாக இருக்கும், ஆனால் ஆர்என்ஏவின் உண்மையான செறிவைத் தீர்மானிக்க முடியாது.உங்கள் ஆர்.என்.ஏ என்பது சிதைவு உள்ளதா என்பது தெளிவாகத் தெரியவில்லை, எனவே இன்னும் துல்லியமான தீர்ப்பை வழங்க எங்களுக்கு ஒரு விரிவான மதிப்பீட்டு முறை தேவை, அதாவது MIQE இல் குறிப்பிடப்பட்டுள்ள நியூக்ளிக் அமில ஒருமைப்பாடு மதிப்பீடு.