உங்களுக்கு எவ்வளவு தெரியும்

பற்றி என்யூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல்

சுத்திகரிக்கப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலத்தின் ஆரம்பம் மற்றும் முடிவு

ஆரம்பத்தில் எல்லாமே கடினம், சுத்திகரிக்கப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலம் தான் அதிகம்

மூலக்கூறு சோதனைகளின் துவக்கம், அடுத்தடுத்த சோதனைகளுக்கு

வெற்றி அல்லது தோல்வி ஒரு முக்கியமான தாக்கத்தை ஏற்படுத்துகிறது.

ட்ரேஸ்/அல்ட்ரா-ட்ரேஸ் UV ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டர் பல அறிவியல் ஆராய்ச்சியாளர்களால் விரும்பப்படுகிறது, ஏனெனில் இது நியூக்ளிக் அமில செறிவு மற்றும் புரதம் மற்றும் உப்பு அயனி எச்சங்களை எளிமையாகவும் விரைவாகவும் பொருளாதார ரீதியாகவும் கண்டறிய முடியும்.

நாம் அனைவரும் அறிந்தபடி, A260 என்றால் நியூக்ளிக் அமில உறிஞ்சுதல் OD மதிப்பு, A280 என்றால் புரதச் செறிவு உறிஞ்சுதல் OD மதிப்பு, A230 என்றால் உப்பு அயனி செறிவு உறிஞ்சுதல் OD மதிப்பு, எனவே A260 என்பது நியூக்ளிக் அமில செறிவை மாற்றும், A260/280 என்றால் புரத எச்சம், A260/230 என்பது ஆய்வின் அடிப்படையிலான ஆய்வின் முடிவு. மற்றும் அது "வழக்கமான” டிஎன்ஏ மற்றும் ஆர்என்ஏவின் தூய்மையை விளக்க முடியும் என்று நம்புவதுஒரு குறிப்பிட்ட அளவு.இது நியூக்ளிக் அமிலம் விளைச்சல் மற்றும் தூய்மையைக் கண்டறிவதற்கான ஒரே தரநிலை அல்ல, இது ஒரு குறிப்பாக மட்டுமே பயன்படுத்தப்படுகிறது, மேலும் இது "தங்கத் தரநிலை" அல்ல.

தெர்மோ ஃபிஷர் ND-2000 கையேடு சோதனை முடிவுகளின் நம்பகத்தன்மையை வலியுறுத்துகிறது

மைக்ரோ/அல்ட்ராமிக்ரோ UV ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் பெறப்பட்ட முடிவுகள் நியூக்ளிக் அமிலத்தின் விளைச்சல் மற்றும் தூய்மையை மட்டுமே பிரதிபலிக்கின்றன, மேலும் பல செல்வாக்கு செலுத்தும் காரணிகள் உள்ளன (ஆப்டிகல் பாதை, மாதிரி அளவு, மாதிரி செறிவு, pH மதிப்பு, உறிஞ்சும் அளவீட்டைப் பாதிக்கும் பிற அயனிகள் போன்றவை) , அளவிடப்பட்ட OD மதிப்பு அவசியமில்லை.அதே நேரத்தில், உறிஞ்சும் மதிப்பை நிர்ணயிக்கும் பொருளின் குறிப்பிட்ட தன்மை இல்லாததால், ஒற்றை இழை DNA, இரட்டை இழை DNA, RNA, dNTPகள் மற்றும் சில புரதங்கள் அனைத்தும் 260nm அலைநீளத்தில் உறிஞ்சுதல் உச்சங்களைக் கொண்டுள்ளன, மேலும் A260 ஆல் நிர்ணயிக்கப்பட்ட செறிவு மட்டுமே உண்மையான DNA அல்லது RNA அவசியமில்லை.செறிவு மற்றும் அதன் ஒருமைப்பாடு மற்றும் சீரழிவு ஆகியவற்றை மதிப்பிட முடியாது.

நமது சுத்திகரிக்கப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலத்தின் தரத்தை எவ்வாறு தீர்மானிப்பது?மைக்ரோ/அல்ட்ராமிக்ரோ UV ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரைக் கண்டறிவதற்குப் பயன்படுத்துவதோடு, நியூக்ளிக் அமிலத்தின் தூய்மையையும் ஒருமைப்பாட்டையும் பார்வைக்குக் காட்டவும், குறிப்பிட்ட அளவிற்கு செறிவைக் குறிப்பிடவும் அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் போன்ற முறைகளும் தேவைப்படுகின்றன.இந்த வழியில், பல்வேறு முறைகளின் கண்டறிதல் முடிவுகளிலிருந்து பெறப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலம் விளைச்சல் மற்றும் தூய்மை நம்பகமானது.

சோதனை விளக்கப்பட ஒப்பீடு

H1299 செல்களின் மரபணு DNA ஆனது A நிறுவனத்தின் DNA பிரித்தெடுத்தல் கருவிகளைப் பயன்படுத்தி பிரித்தெடுக்கப்பட்டது, மேலும் குறிப்பிடத்தக்க தூய்மையற்ற மாசுபாடு காணப்பட்டது, இதன் விளைவாக உயர் OD மதிப்புகள்

(OD அளவீட்டு மதிப்பு மற்றும் தொடர்புடைய எலக்ட்ரோபெரோகிராம்)

மதிப்பீட்டு குறியீடு

நியூக்ளிக் அமிலம் விளைச்சல் மற்றும் தர சோதனைக்கு "தங்க தரநிலை" உள்ளதா?

நமக்குத் தெரிந்தவரை, எளிய, வேகமான மற்றும் மலிவான முறை இல்லை.ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டர், ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் அல்லது மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி என எதுவாக இருந்தாலும், அவை அனைத்தும் நியூக்ளிக் அமிலத்தின் செறிவு மற்றும் தூய்மையை வெவ்வேறு அம்சங்களில் பிரதிபலிக்கின்றன, மேலும் அவை ஒன்றையொன்று குறிப்பிடுவதன் மூலம் தீர்மானிக்கப்பட வேண்டும்.

சிறந்த மதிப்பீட்டு குறியீடு எப்போதும்பின்தொடர்தல் சோதனை பயன்பாடு.இது தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் PCR பெருக்கத்தின் செயல்திறனை பாதிக்காது.நம்பகமான பெருக்க தயாரிப்புகள் மற்றும் Ct மதிப்புகளைப் பெறுதல் மற்றும் வரிசைப்படுத்துவதன் மூலம் முழுமையான வரிசையைப் பெறுவது வெற்றிகரமான நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் ஆகும்.

சுருக்கமாக, "நல்ல கீழ்நிலை பரிசோதனை முடிவுகளை நல்ல பிரித்தெடுத்தல் அளவுருக்களாகப் பயன்படுத்துதல்" என்ற பார்வையால் விகிதம்-மட்டும் கோட்பாட்டின் பார்வை சவால் செய்யப்பட வேண்டும்!

அதிக டிஎன்ஏ/ஆர்என்ஏ தூய்மையைப் பெற பரிந்துரைக்கப்பட்ட ஃபோர்ஜீன் டிஎன்ஏ ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கும் கருவிகள்:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/