செவித்திறன் இழப்பு (HL) என்பது மனிதர்களில் மிகவும் பொதுவான உணர்வு குறைபாடு நோயாகும்.வளர்ந்த நாடுகளில், குழந்தைகளில் 80% முன்மொழி காது கேளாமை வழக்குகள் மரபணு காரணிகளால் ஏற்படுகின்றன.மிகவும் பொதுவானவை ஒற்றை-மரபணு குறைபாடுகள் (படம். 1 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது), 124 மரபணு மாற்றங்கள் மனிதர்களில் நான்சிண்ட்ரோமிக் கேட்கும் இழப்புடன் தொடர்புடையதாகக் கண்டறியப்பட்டுள்ளது, மீதமுள்ளவை சுற்றுச்சூழல் காரணிகளால் ஏற்படுகின்றன.ஒரு கோக்லியர் உள்வைப்பு (செவி நரம்புக்கு நேரடியாக மின் தூண்டுதலை வழங்கும் உள் காதில் வைக்கப்படும் ஒரு மின்னணு சாதனம்) கடுமையான எச்.எல் சிகிச்சைக்கு மிகவும் பயனுள்ள வழி, அதே சமயம் ஒரு செவிப்புலன் (ஒலி அலைகளை மாற்றும் மற்றும் பெருக்கும் ஒரு வெளிப்புற மின்னணு சாதனம்) மிதமான எச்.எல் நோயாளிகளுக்கு உதவும்.இருப்பினும், பரம்பரை HL (GHL) சிகிச்சைக்கு தற்போது மருந்துகள் எதுவும் இல்லை.சமீபத்திய ஆண்டுகளில், உள் காது செயலிழப்புக்கு சிகிச்சையளிப்பதற்கான ஒரு நம்பிக்கைக்குரிய அணுகுமுறையாக மரபணு சிகிச்சை அதிக கவனத்தைப் பெற்றுள்ளது.

வரைபடம். 1.காது கேளாமையுடன் தொடர்புடைய மாறுபாடு வகையின் விநியோகம்.[1]

சமீபத்தில், சால்க் இன்ஸ்டிடியூட் மற்றும் ஷெஃபீல்டு பல்கலைக்கழக விஞ்ஞானிகள் மூலக்கூறு சிகிச்சை - முறைகள் மற்றும் மருத்துவ வளர்ச்சி [2] இல் ஒரு ஆராய்ச்சி முடிவை வெளியிட்டனர், இது பரம்பரை காது கேளாமைக்கான விவோ மரபணு சிகிச்சையில் பரந்த பயன்பாட்டு வாய்ப்புகளைக் காட்டியது.சால்க் இன்ஸ்டிடியூட்டின் உதவி ஆராய்ச்சி பேராசிரியரும், வெயிட் சென்டர் ஃபார் அட்வான்ஸ்டு பயோபோடோனிக்ஸ் இயக்குநருமான யூரி மேனர், அவர் கடுமையான செவித்திறன் இழப்புடன் பிறந்ததாகவும், செவித்திறனை மீட்டெடுப்பது ஒரு அற்புதமான பரிசாக இருக்கும் என்றும் கூறினார்.அவரது முந்தைய ஆராய்ச்சியில் Eps8 என்பது ஆக்டின் பைண்டிங் மற்றும் கேப்பிங் செயல்பாடுகளுடன் கூடிய ஆக்டின் ஒழுங்குமுறை புரதம் என்று கண்டறியப்பட்டது;கோக்லியர் ஹேர் செல்களில், MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 மற்றும் GNAI3 ஆகியவற்றுடன் Eps8 ஆல் உருவாக்கப்பட்ட புரதச் சிக்கலானது முக்கியமாக நீண்ட ஸ்டீரியோசிலியாவின் முனைகளில் உள்ளது, இது MYO15A உடன் இணைந்து BAIAP2L2 ஐ குறுகிய ஸ்டீரியோசிலியாவின் நுனிகளில் உள்ளூர்மயமாக்குகிறது, முடி மூட்டைகளை பராமரிக்க தேவைப்படுகிறது.எனவே, Eps8 முடி செல்களின் ஸ்டீரியோசிலியாவின் நீளத்தைக் கட்டுப்படுத்தலாம், இது சாதாரண செவிப்புலன் செயல்பாட்டிற்கு அவசியம்;Eps8 நீக்குதல் அல்லது பிறழ்வு குறுகிய ஸ்டீரியோசிலியாவுக்கு வழிவகுக்கும், இது மூளையின் உணர்திறனுக்கான மின் சமிக்ஞைகளாக ஒலியை சரியாக மாற்ற முடியாது, இது காது கேளாமைக்கு வழிவகுக்கிறது..அதே நேரத்தில், ஷெஃபீல்ட் பல்கலைக்கழகத்தின் பேராசிரியரான வால்டர் மார்கோட்டி, Eps8 இல்லாத நிலையில் முடி செல்கள் சாதாரணமாக வளர முடியாது என்பதைக் கண்டறிந்தார்.இந்த ஆய்வில், மேனரும் மார்கோட்டியும் இணைந்து, ஸ்டீரியோசிலியரி செல்களில் Eps8ஐச் சேர்ப்பதன் மூலம் அவற்றின் செயல்பாட்டை மீட்டெடுக்க முடியுமா மற்றும் அதையொட்டி, எலிகளின் செவிப்புலன் மேம்படுத்த முடியுமா என்று ஆராயப்பட்டது.வட்ட சாளர சவ்வு ஊசி மூலம் Eps8-/- புதிதாகப் பிறந்த P1-P2 எலிகளின் கோக்லியாவில் காட்டு-வகை EPS8 அடங்கிய குறியீட்டு வரிசையை வழங்க, அடினோ-தொடர்புடைய வைரஸ் (AAV) திசையன் Anc80L65 ஐ ஆராய்ச்சி குழு பயன்படுத்தியது;மவுஸ் கோக்லியர் முடி செல்களில் ஸ்டீரியோசிலியாவின் செயல்பாடு முதிர்ச்சியடைவதற்கு முன்பே சரி செய்யப்பட்டது;மற்றும் பழுதுபார்க்கும் விளைவு இமேஜிங் தொழில்நுட்பம் மற்றும் ஸ்டீரியோசிலியாவின் அளவீடு ஆகியவற்றால் வகைப்படுத்தப்பட்டது.Eps8 ஸ்டீரியோசிலியாவின் நீளத்தை அதிகரித்தது மற்றும் குறைந்த அதிர்வெண் செல்களில் முடி செல் செயல்பாட்டை மீட்டெடுத்தது என்று முடிவுகள் காட்டுகின்றன.காலப்போக்கில், உயிரணுக்கள் இந்த மரபணு சிகிச்சை மூலம் மீட்கப்படும் திறனை இழக்கின்றன என்பதையும் அவர்கள் கண்டறிந்தனர்.எலிகள் பிறந்த பிறகு, Eps8-/- முடி செல்கள் முதிர்ச்சியடைந்து அல்லது சரிசெய்ய முடியாத அளவுக்கு சேதம் அடைந்திருக்கலாம் என்பதால், இந்த சிகிச்சையானது கருப்பையில் கொடுக்கப்பட வேண்டியிருக்கலாம்."Eps8 என்பது பல்வேறு செயல்பாடுகளைக் கொண்ட ஒரு புரதமாகும், மேலும் ஆராய இன்னும் நிறைய இருக்கிறது" என்று மேனர் கூறினார்.எதிர்கால ஆராய்ச்சியில் Eps8 மரபணு சிகிச்சையின் பல்வேறு வளர்ச்சி நிலைகளில் செவித்திறனை மீட்டெடுப்பதில் ஏற்படும் விளைவையும், சிகிச்சை வாய்ப்புகளை நீடிக்க முடியுமா என்பதையும் ஆராய்வது அடங்கும்.தற்செயலாக, நவம்பர் 2020 இல், இஸ்ரேலில் உள்ள டெல் அவிவ் பல்கலைக்கழகத்தின் பேராசிரியர் கரேன்பி அவ்ரஹாம் தனது முடிவுகளை EMBO மாலிகுலர் மெடிசின் இதழில் வெளியிட்டார் [3], ஒரு புதுமையான மரபணு சிகிச்சை தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தி பாதிப்பில்லாத செயற்கை அடினோ-தொடர்புடைய வைரஸ் AAV9-PHP ஐ உருவாக்கினார்.B, Syne4-/- எலிகளின் முடி செல்களில் உள்ள மரபணு குறைபாடு, Syne4 இன் குறியீட்டு வரிசையை சுமந்து செல்லும் வைரஸை எலிகளின் உள் காதில் செலுத்துவதன் மூலம் சரி செய்யப்பட்டது, இது முடி செல்களுக்குள் நுழைந்து, எடுத்துச் செல்லப்பட்ட மரபணுப் பொருட்களை வெளியிட அனுமதிக்கிறது, அவை முதிர்ச்சியடைவதற்கும் சாதாரணமாக செயல்படுவதற்கும் அனுமதிக்கிறது (படம் 2 இல் உள்ளது போல).

படம்2.கார்டியின் உறுப்பு மற்றும் நெஸ்ப்ரின்-4 இன் செல்லுலார் செயல்பாடு ஆகியவற்றை மையமாகக் கொண்டு, உள் காது உடற்கூறியல் திட்டவட்டமான பிரதிநிதித்துவம்.

மரபணு சிகிச்சையின் நோக்கத்தை அடைய மரபணு சிகிச்சையைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், மரபணு மட்டத்தில் மரபணு மாற்றப்பட்ட மரபணுக்களை (அதாவது, நோயின் மரபணு மாற்றங்களைக் கட்டுப்படுத்துதல்) செருகுவதன் மூலம், அகற்றுவதன் மூலம் அல்லது சரிசெய்வதன் மூலம் அதிக மருத்துவ விளைவைக் கொண்டிருப்பதைக் காணலாம்.விண்ணப்ப வாய்ப்புகள்.மரபணு குறைபாடுள்ள காது கேளாமைக்கான தற்போதைய மரபணு சிகிச்சை முறைகளை பின்வரும் வகைகளாகப் பிரிக்கலாம்:

மரபணு மாற்று

மரபணு மாற்று என்பது மரபணு சிகிச்சையின் மிகவும் "நேரான" வடிவமாகும், இது ஒரு குறைபாடுள்ள மரபணுவை அடையாளம் கண்டு, மரபணுவின் இயல்பான அல்லது காட்டு வகை நகலுடன் மாற்றுவதன் அடிப்படையில் உள்ளது.வெசிகுலர் குளுட்டமேட் டிரான்ஸ்போர்ட்டர் 3 (VGLUT3) மரபணுவை நீக்கியதால் ஏற்படும் காது கேளாமைக்கான முதல் வெற்றிகரமான உள் காது மரபணு சிகிச்சை ஆய்வு;உள் காது முடி செல்களில் (IHC கள்) வெளிப்புற VGLUT3 அதிகப்படியான அழுத்தத்தின் AAV1-மத்தியஸ்த விநியோகம் நீடித்த செவிப்புலன் மீட்பு, பகுதி ரிப்பன் சினாப்டிக் உருவவியல் மீட்பு மற்றும் வலிப்பு எதிர்வினைகளை ஏற்படுத்தும் [4].எவ்வாறாயினும், மேலே உள்ள அறிமுகத்தில் விவரிக்கப்பட்டுள்ள இரண்டு AAV-வழங்கப்பட்ட மரபணு மாற்றீடுகள் உள்ளிட்ட எடுத்துக்காட்டுகளில், சில வகையான மரபணு நீக்குதல் பரம்பரை காது கேளாமை குறைபாடுகளுக்குப் பயன்படுத்தப்படும் சுட்டி மாதிரிகள் மனிதர்களிடமிருந்து தற்காலிகமாக வேறுபட்டவை என்பதையும், P1 எலிகளில், உள் காது வளர்ச்சியின் முதிர்ந்த கட்டத்தில் உள்ளது என்பதையும் கவனத்தில் கொள்ள வேண்டும்.மாறாக, மனிதர்கள் முதிர்ந்த உள் காதுடன் பிறக்கிறார்கள்.முதிர்ந்த எலியின் காதுகளுக்கு மரபணு சிகிச்சை அளிக்கப்படாவிட்டால், இந்த வேறுபாடு மனித பரம்பரை காது கேளாமை கோளாறுகளுக்கு சிகிச்சையளிப்பதில் சுட்டி முடிவுகளின் சாத்தியமான பயன்பாட்டைத் தடுக்கிறது.

மரபணு திருத்தம்: CRISPR/Cas9

"மரபணு மாற்றத்துடன்" ஒப்பிடும்போது, ​​மரபணு எடிட்டிங் தொழில்நுட்பத்தின் வளர்ச்சி, வேரிலிருந்தே மரபணு நோய்களுக்கு சிகிச்சை அளிக்கும் விடியலைக் கொண்டு வந்துள்ளது.முக்கியமாக, ஜீன் எடிட்டிங் முறையானது ஆதிக்கம் செலுத்தும் பரம்பரை காது கேளாமை நோய்களுக்குப் பொருந்தாத பாரம்பரிய ஓவர் எக்ஸ்பிரஷன் மரபணு சிகிச்சை முறைகளின் குறைபாடுகளையும், அதிகப்படியான வெளிப்பாடு முறை நீண்ட காலம் நீடிக்காத பிரச்சனையையும் ஈடுசெய்கிறது.சீன ஆராய்ச்சியாளர்கள் AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2 மரபணு எடிட்டிங் முறையைப் பயன்படுத்தி Myo6WT/C442Y எலிகளில் உள்ள Myo6C442Y விகாரி அலீலை குறிப்பாக நாக் அவுட் செய்த பிறகு, நாக் அவுட் செய்யப்பட்ட 5 மாதங்களுக்குள், எலிகள் மாதிரியின் செவிப்புலன் செயல்பாடு மீட்டெடுக்கப்பட்டது;அதே நேரத்தில், உள் காதில் உள்ள முடி உயிரணுக்களின் உயிர்வாழ்வு விகிதம் மேம்படுத்தப்பட்டது, சிலியாவின் வடிவம் வழக்கமானதாக மாறியது மற்றும் மின் இயற்பியல் குறிகாட்டிகள் சரி செய்யப்பட்டது [5].Myo6 மரபணு மாற்றத்தால் ஏற்படும் பரம்பரை காது கேளாமைக்கான சிகிச்சைக்காக CRISPR/Cas9 தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தும் உலகின் முதல் ஆய்வு இதுவாகும், மேலும் இது பரம்பரை காது கேளாமைக்கான சிகிச்சைக்கான மரபணு எடிட்டிங் தொழில்நுட்பத்தின் முக்கியமான ஆராய்ச்சி முன்னேற்றமாகும்.சிகிச்சையின் மருத்துவ மொழிபெயர்ப்பு உறுதியான அறிவியல் அடிப்படையை வழங்குகிறது.

மரபணு சிகிச்சை விநியோக முறைகள்

மரபணு சிகிச்சை வெற்றிகரமாக இருக்க, நிர்வாண டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகள் அவற்றின் ஹைட்ரோஃபிலிசிட்டி மற்றும் பாஸ்பேட் குழுக்களின் எதிர்மறை மின்னூட்டம் காரணமாக செல்களை திறம்பட ஊடுருவ முடியாது, மேலும் கூடுதல் நியூக்ளிக் அமில மூலக்கூறுகளின் ஒருமைப்பாட்டை உறுதிப்படுத்த, பாதுகாப்பான மற்றும் பயனுள்ள முறையைத் தேர்ந்தெடுக்க வேண்டும்.நிரப்பப்பட்ட டிஎன்ஏ இலக்கு செல் அல்லது திசுக்களுக்கு வழங்கப்படுகிறது.AAV அதன் உயர் தொற்று விளைவு, குறைந்த நோயெதிர்ப்புத் திறன் மற்றும் பல்வேறு திசு வகைகளுக்கு பரந்த வெப்பமண்டலத்தின் காரணமாக நோய் சிகிச்சைக்கான விநியோக வாகனமாக பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.தற்போது, ​​ஒரு பெரிய ஆய்வுப் பணியானது, மவுஸ் கோக்லியாவில் உள்ள வெவ்வேறு செல் வகைகளுடன் ஒப்பிடும்போது AAV இன் வெவ்வேறு துணை வகைகளின் வெப்பமண்டலத்தை தீர்மானித்துள்ளது.செல்-குறிப்பிட்ட ஊக்குவிப்பாளர்களுடன் இணைந்து AAV டெலிவரி பண்புகளை பயன்படுத்தி செல்-குறிப்பிட்ட வெளிப்பாட்டை அடைய முடியும், இது இலக்கு-இல்லாத விளைவுகளை குறைக்கலாம்.கூடுதலாக, பாரம்பரிய AAV திசையன்களுக்கு மாற்றாக, புதிய செயற்கை AAV திசையன்கள் தொடர்ந்து உருவாக்கப்படுகின்றன மற்றும் உள் காதில் சிறந்த கடத்தும் திறனைக் காட்டுகின்றன, இதில் AAV2/Anc80L65 மிகவும் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.வைரஸ் அல்லாத விநியோக முறைகளை இயற்பியல் முறைகள் (மைக்ரோ இன்ஜெக்ஷன் மற்றும் எலக்ட்ரோபோரேஷன்) மற்றும் வேதியியல் முறைகள் (லிப்பிட் அடிப்படையிலான, பாலிமர் அடிப்படையிலான மற்றும் தங்க நானோ துகள்கள்) என மேலும் பிரிக்கலாம்.இரண்டு அணுகுமுறைகளும் பரம்பரை காது கேளாமை கோளாறுகளுக்கான சிகிச்சையில் பயன்படுத்தப்படுகின்றன மற்றும் வெவ்வேறு நன்மைகள் மற்றும் வரம்புகளைக் காட்டியுள்ளன.ஒரு வாகனமாக மரபணு சிகிச்சைக்கான டெலிவரி வாகனத்துடன் கூடுதலாக, வெவ்வேறு இலக்கு செல் வகைகள், நிர்வாகத்தின் வழிகள் மற்றும் சிகிச்சை செயல்திறன் ஆகியவற்றின் அடிப்படையில் விவோ மரபணு நிர்வாகத்திற்கான வெவ்வேறு அணுகுமுறைகளைப் பயன்படுத்தலாம்.உள் காதின் சிக்கலான அமைப்பு இலக்கு செல்களை அடைவதை கடினமாக்குகிறது மற்றும் மரபணு எடிட்டிங் முகவர்களின் விநியோகம் மெதுவாக உள்ளது.சவ்வு தளம் தற்காலிக எலும்பின் எலும்பு தளத்திற்குள் அமைந்துள்ளது மற்றும் கோக்லியர் குழாய், அரை வட்ட குழாய், யூட்ரிக்கிள் மற்றும் பலூன் ஆகியவற்றை உள்ளடக்கியது.அதன் உறவினர் தனிமைப்படுத்தல், குறைந்த நிணநீர் சுழற்சி மற்றும் இரத்த-பிரமை தடை மூலம் இரத்தத்தில் இருந்து பிரித்தல் ஆகியவை பிறந்த குழந்தை எலிகளுக்கு மட்டுமே சிகிச்சை முறைகளை திறம்பட வழங்குவதை கட்டுப்படுத்துகிறது.மரபணு சிகிச்சைக்கு பொருத்தமான வைரஸ் டைட்டர்களைப் பெற, உள் காதுக்குள் வைரஸ் வெக்டார்களை நேரடியாக உள்ளூர் உட்செலுத்துதல் அவசியம்.உட்செலுத்தலின் நிறுவப்பட்ட வழிகளில் அடங்கும் [6]: (1) வட்ட சாளர சவ்வு (RWM), (2) ட்ரக்கியோஸ்டமி, (3) எண்டோலிம்ஃபாடிக் அல்லது பெரிலிம்ஃபாடிக் கோக்லியோஸ்டமி, (4) வட்ட சாளர சவ்வு மற்றும் குழாய் ஃபென்ஸ்ட்ரேஷன் (CF) (படம் 3 இல் உள்ளது போல).

படம்3.மரபணு சிகிச்சையின் உள் காது விநியோகம்.

மருத்துவ மொழிபெயர்ப்பு இலக்குகளின் அடிப்படையில் மரபணு சிகிச்சையில் பல முன்னேற்றங்கள் செய்யப்பட்டுள்ள போதிலும், மரபணு நோய்களால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளுக்கு, குறிப்பாக பாதுகாப்பான மற்றும் பயனுள்ள திசையன்கள் மற்றும் விநியோக முறையின் வளர்ச்சியில், மரபணு சிகிச்சையானது முதல்-வரிசை சிகிச்சை விருப்பமாக மாறுவதற்கு முன், அதிக வேலைகள் செய்யப்பட வேண்டும்.ஆனால் எதிர்காலத்தில், இந்த வகையான சிகிச்சைகள் தனிப்பயனாக்கப்பட்ட சிகிச்சையின் முக்கிய அம்சமாக மாறும் மற்றும் மரபணு கோளாறுகள் உள்ளவர்கள் மற்றும் அவர்களது குடும்பங்களின் வாழ்க்கையில் பெரும் நேர்மறையான தாக்கத்தை ஏற்படுத்தும் என்று நாங்கள் நம்புகிறோம்.

ஃபோர்ஜீன் இலக்கு வைக்கப்பட்ட மரபணுக்களுக்கான உயர்-செயல்திறன் திரையிடல் கருவியை அறிமுகப்படுத்தியுள்ளது, இது வேகமானது மற்றும் ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் இல்லாமல் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் qPCR எதிர்வினைகளைச் செய்ய முடியும்.

தயாரிப்பு இணைப்புகள்

செல் நேரடி RT-qPCR கிட்-தக்மான்/SYBR GREEN I

மேலும் தயாரிப்பு தகவலுக்கு, தொடர்பு கொள்ளவும்:

overseas@foregene.com