பரிசோதனை பணியாளர்களின் நடத்தையை தரப்படுத்த PCR பரிசோதனை SOP ஐ நிறுவவும்.
பரிசோதனை செய்பவர் இயக்க நடைமுறைகளுக்கு கண்டிப்பாகக் கட்டுப்பட்டு, மனித காரணிகளால் ஏற்படக்கூடிய PCR மாசுபாட்டைக் குறைக்கிறார் அல்லது மாசு ஏற்படுவதைத் தடுக்கிறார்.கூடுதலாக, பரிசோதனை செய்பவர் தொடர்புடைய உபகரணங்களை இயக்குவதில் தேர்ச்சி, முழு வேலை செயல்முறையையும் தெளிவுபடுத்துதல், மாசுபாட்டின் சிகிச்சை முறைகள் மற்றும் ஆய்வக தரக் கட்டுப்பாட்டு முறைகளில் தேர்ச்சி பெறுதல் மற்றும் சோதனை முடிவுகளை சரியாக விளக்குவது உள்ளிட்ட தொழில்முறை அறிவு மற்றும் திறன்களைக் கொண்டிருக்க வேண்டும்.
நிலையான PCR ஆய்வகத்தை நிறுவவும்.
PCR ஆய்வகம் கொள்கையளவில் நான்கு பகுதிகளாகப் பிரிக்கப்பட்டுள்ளது, அதாவது மறுஉருவாக்க தயாரிப்பு பகுதி, மாதிரி செயலாக்கப் பகுதி, பெருக்கப் பகுதி மற்றும் பெருக்க தயாரிப்பு பகுப்பாய்வு பகுதி.முதல் இரண்டு பகுதிகள் பெருக்கத்திற்கு முந்தைய பகுதிகள், கடைசி இரண்டு பகுதிகள் பிந்தைய பெருக்க பகுதிகள்.பெருக்கத்திற்கு முந்தைய மண்டலமும், பெருக்கத்திற்குப் பிந்தைய மண்டலமும் கண்டிப்பாகப் பிரிக்கப்பட வேண்டும்.சோதனைப் பொருட்கள், ரியாஜெண்டுகள், ரெக்கார்டிங் பேப்பர், பேனாக்கள், துப்புரவுப் பொருட்கள் போன்றவை முன்-பெருக்கப் பகுதியிலிருந்து பெருக்கத்திற்குப் பிந்தைய பகுதிக்கு மட்டுமே பாய முடியும், அதாவது, வினைப்பொருள் தயாரிப்புப் பகுதி → மாதிரி செயலாக்கப் பகுதி → பெருக்கப் பகுதி → பெருக்க தயாரிப்பு பகுப்பாய்வு பகுதி, மேலும் பின்னோக்கிப் பாயக்கூடாது .ஆய்வகத்திலுள்ள காற்றோட்டமானது பெருக்கத்திற்கு முந்தைய பகுதியிலிருந்து பெருக்கத்திற்குப் பிந்தைய பகுதிக்கு பாய வேண்டும், பின்னோக்கிப் பாயக்கூடாது.சிறந்த PCR ஆய்வக வடிவமைப்பு கீழே காட்டப்பட்டுள்ளது:
படம் A: இடையக அறையில் எதிர்மறை அழுத்தத்துடன் கூடிய சிறந்த PCR ஆய்வக அமைவு முறை
படம் B: இடையக அறையில் நேர்மறை அழுத்தத்துடன் கூடிய சிறந்த PCR ஆய்வக அமைவு முறை
படம் A மற்றும் Figure B இல் கொடுக்கப்பட்டுள்ள PCR ஆய்வக அமைவு வரைபடங்கள் மிகவும் சிறந்த அமைவு பயன்முறையாக இருக்க வேண்டும், மேலும் நிபந்தனைகளுடன் கூடிய ஆய்வகம் வடிவமைப்பிற்காக இந்த பயன்முறையைக் குறிப்பிடலாம்.சாதாரண ஆய்வகங்களுக்கு, PCR பெருக்கப் பகுதி மற்றும் தயாரிப்பு பகுப்பாய்வு பகுதி ஆகியவற்றைப் பிரிக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது, மேலும் மாதிரி தயாரிப்பு பகுதி மற்றும் PCR பெருக்கப் பகுதியில் அட்டையின் திறப்பு முடிந்தவரை குறைக்கப்பட வேண்டும்.நினைவில் கொள்ளுங்கள்: தயாரிப்பு பகுப்பாய்வு பகுதியில் உள்ள தயாரிப்புகள் மற்றும் சோதனை பொருட்கள் மாதிரி தயாரிப்பு பகுதி மற்றும் PCR பெருக்க பகுதிக்கு கொண்டு செல்லப்படுவது கண்டிப்பாக தடைசெய்யப்பட்டுள்ளது.
ஆய்வகம் PCR கண்டறிதல் மற்றும் அடையாளத்தை மட்டுமே செய்தால், வழக்கமான PCR க்குப் பதிலாக ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR ஐப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
ஃப்ளோரசன்ஸின் அளவு PCR கண்டறிதல் முடிவுகளை ஃப்ளோரசன்ஸ் சிக்னல்கள் மூலம் சேகரித்து பகுப்பாய்வு செய்யலாம், எனவே எதிர்வினைக்குப் பிறகு எலக்ட்ரோபோரேசிஸிற்கான மூடியைத் திறக்க வேண்டிய அவசியமில்லை, இது ஏரோசோல்களை உருவாக்க எதிர்வினை தயாரிப்புகளின் கசிவால் ஏற்படும் PCR தயாரிப்பு மாசுபாட்டைத் தவிர்க்கிறது.ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் ஏற்றுதல் படியின் போது தொப்பி திறப்புகளின் எண்ணிக்கையை நீங்கள் அதிகரித்தால், ஏரோசல் மாசு ஏற்பட வாய்ப்புள்ளது.அளவு PCR பயன்பாட்டை ஊக்குவிக்கவும், படிப்படியாக தரமான PCR ஐ மாற்றவும் பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
பிசிஆர் எதிர்வினைக்கு யுஎன்ஜி எதிர்ப்பு பிசிஆர் தயாரிப்பு மாசுபடுத்தும் அமைப்பு பயன்படுத்தப்படுகிறது.
கணினி dTTPக்குப் பதிலாக dUTP ஐப் பயன்படுத்துகிறது.PCR எதிர்வினைக்குப் பிறகு, அனைத்து PCR தயாரிப்புகளும் (DNA துண்டுகள்) dUTP உடன் இணைக்கப்படுகின்றன;PCR எதிர்வினையின் அடுத்த சுற்றில், கணினியில் சேர்க்கப்படும் UNG நொதி PCRக்கு 5 நிமிடங்களுக்கு முன் 37°C வெப்பநிலையில் அடைக்கப்படுகிறது, இது குறிப்பாக dUTP உள்ள அனைத்து DNA துண்டுகளையும் சிதைத்து பின்னர் PCR வினையைச் செய்யும்.இது PCR தயாரிப்புகளால் ஏற்படும் ஏரோசல் மாசுபாட்டை முற்றிலும் அகற்றும்.விளைவு கீழே உள்ள படத்தில் காட்டப்பட்டுள்ளது:
குறிப்பு: நேரடி PCR தொடருக்கு, Foregene இன் PCR எதிர்ப்பு தயாரிப்பு மாசுபடுத்தும் அமைப்பின் தொடர் தயாரிப்புகளை நீங்கள் தேர்வு செய்யலாம்.பரிந்துரை
பெரிய அளவிலான மரபணு வகை சோதனைகளை நடத்தும் ஆய்வகங்களுக்கு, நியாயமான ஆய்வகங்களை நிர்மாணிப்பதைத் தவிர, ரியாஜெண்டுகளை பரிசோதிக்க UNG எதிர்ப்பு PCR தயாரிப்பு மாசுபடுத்தும் முறையைப் பயன்படுத்த கடுமையாக பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
நினைவூட்டல்: இந்த அமைப்பைப் பயன்படுத்துவதால் ஏற்கனவே ஏற்பட்டுள்ள PCR தயாரிப்பு மாசுபாட்டை அகற்ற முடியாது.எனவே, யுஎன்ஜி அமைப்பு தொடர்புடைய சோதனையின் தொடக்கத்தில் பயன்படுத்தப்பட வேண்டும், மேலும் பிசிஆர் தயாரிப்புகள் தவறான நேர்மறை மாசுபடுவதைத் தடுக்க, பிசிஆர் பெருக்கத்திற்கு யுஎன்ஜி அமைப்பு பயன்படுத்தப்பட வேண்டும்.
பெரிய அளவிலான சோதனைகளை மேற்கொள்ளும் போது ஃபோர்ஜீனின் நேரடி PCR-UNG முறையைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.
தாவர இலை நேரடி PCR கிட்-UNG
தாவர விதை நேரடி PCR கிட்-UNG
விலங்கு திசு நேரடி PCR கிட்-UNG
மவுஸ் டெயில் நேரடி PCR கிட்-UNG
வரிக்குதிரை மீன் நேரடி PCR கிட்-UNG.
ஃபோர்ஜீனின் இந்தத் தொடர் கிட்கள்PCR கண்டறிதலை விரைவாகவும் பெரிய அளவிலும் செய்வது மட்டுமல்லாமல், PCR தயாரிப்பு மாசுபாட்டை திறம்பட தடுக்கவும் கட்டுப்படுத்தவும் முடியும்.
இடுகை நேரம்: மார்ச்-19-2021
