• முகநூல்
  • இணைக்கப்பட்ட
  • வலைஒளி

PCR எதிர்வினையின் சிறப்பான அம்சம் அதன் பெரிய பெருக்க திறன் மற்றும் மிக அதிக உணர்திறன் ஆகும்.PCR செயல்திறன் மற்றும் கண்டறிதல் செயல்திறனை மேம்படுத்தும் பொருட்டு, PCR பெருக்க திறன் மற்றும் கண்டறிதல் உணர்திறனை மேம்படுத்துவதில் நாங்கள் உறுதியாக உள்ளோம், ஆனால் தலைவலி பரிசோதனையின் செயல்பாட்டில் உள்ளது.தவறான நேர்மறைகள் அடிக்கடி நிகழ்கின்றன, மேலும் மிகச் சிறிய அளவிலான மாதிரி குறுக்கு-மாசு அல்லது PCR தயாரிப்பு மாசுபாடு சோதனையில் தவறான நேர்மறைகளை ஏற்படுத்தலாம்.

ஐந்து வகையான PCR தயாரிப்பு மாசுபாடு

PCR மாசுபாட்டிற்கு பல காரணங்கள் உள்ளன, அவை தோராயமாக பின்வரும் வகைகளாகப் பிரிக்கப்படுகின்றன:

1. மாதிரிகள் இடையே குறுக்கு மாசுபாடு

1.1

மாதிரி மாசுபாடு முக்கியமாக மாதிரியை சேகரிப்பதற்கான கொள்கலனில் மாசுபடுவதால் ஏற்படுகிறது, அல்லது மாதிரியை வைக்கும்போது, ​​​​தளர்வான சீல் காரணமாக கொள்கலனில் இருந்து வெளியேறுகிறது, அல்லது மாதிரியானது கொள்கலனின் வெளிப்புறத்தில் ஒட்டிக்கொண்டது, இது குறுக்கு-மாசுபாட்டை ஏற்படுத்துகிறது;மாசுபாடு மாதிரிகள் இடையே மாசு ஏற்படுகிறது;சில நுண்ணுயிர் மாதிரிகள், குறிப்பாக வைரஸ்கள், ஏரோசோல்களுடன் பரவலாம் அல்லது ஏரோசோல்களை உருவாக்கலாம், இதன் விளைவாக பரஸ்பர மாசு ஏற்படுகிறது.

2. பிசிஆர் ரியாஜென்ட் மாசுபாடு

முக்கிய காரணம் PCR வினைகளை தயாரிக்கும் போது, ​​மாதிரி துப்பாக்கி, கொள்கலன், இரட்டை காய்ச்சி வடிகட்டிய நீர் மற்றும் பிற தீர்வுகள் PCR நியூக்ளிக் அமில டெம்ப்ளேட்டால் மாசுபடுத்தப்படுகின்றன.

1.2

3.குளோனிங் பிளாஸ்மிட் மாசுபாடு

1.3

மூலக்கூறு உயிரியல் ஆய்வகங்கள் மற்றும் குளோன் செய்யப்பட்ட பிளாஸ்மிட்களை நேர்மறையான கட்டுப்பாடுகளாகப் பயன்படுத்தும் சில ஆய்வகங்களில், குளோன் செய்யப்பட்ட பிளாஸ்மிட் மாசுபாட்டின் பிரச்சனையும் பொதுவானது.யூனிட் வால்யூமில் குளோனிங் பிளாஸ்மிட்டின் உள்ளடக்கம் மிக அதிகமாக இருப்பதால், சுத்திகரிப்பு செயல்பாட்டில் அதிக கருவிகள் மற்றும் எதிர்வினைகள் தேவைப்படுகின்றன, மேலும் உயிரணுக்களின் வலுவான வளர்ச்சி மற்றும் இனப்பெருக்கம் திறன் காரணமாக உயிரணுக்களில் உள்ள பிளாஸ்மிட் மாசுபடுவதற்கான வாய்ப்புகள் அதிகம்.

4.பெருக்கப்பட்ட பொருட்களின் மாசுபாடு

பிசிஆர் எதிர்வினைகளில் பெருக்கப்பட்ட தயாரிப்புகளின் மாசுபாடு மிகவும் பொதுவான மாசுபாடு பிரச்சனையாகும்.PCR தயாரிப்பின் நகல் அளவு பெரியதாக இருப்பதால் (பொதுவாக 1013 பிரதிகள்/மிலி), இது PCR கண்டறிதல் நகல் எண்ணின் வரம்பை விட அதிகமாக உள்ளது, PCR தயாரிப்பு மாசுபாட்டின் மிகக் குறைந்த அளவு தவறான நேர்மறைகளை ஏற்படுத்தலாம்.

1.4

5.ஏரோசல் மாசுபாடு

1.5

ஏரோசல் மாசுபாடு PCR தயாரிப்புகளின் மாசுபாட்டின் மிகவும் சாத்தியமான வடிவமாகும், மேலும் இது கவனிக்கப்படுவதற்கு எளிதானது.இது திரவ மேற்பரப்பு மற்றும் காற்று இடையே உராய்வு மூலம் உருவாகிறது.பொதுவாக, ஏரோசல் மாசுபாடு மூடி திறக்கப்படும் போது, ​​மாதிரி உறிஞ்சப்படும் போது அல்லது எதிர்வினை குழாய் தீவிரமாக அசைக்கப்படும் போது கூட உருவாகலாம்.கணக்கீடுகளின்படி, ஒரு ஏரோசல் துகள் 48,000 பிரதிகள் கொண்டிருக்கும், அதனால் ஏற்படும் மாசுபாடு சிறப்பு கவனம் செலுத்த வேண்டிய ஒரு பிரச்சனையாகும்.

குறிப்பாக, சோதனை ஆய்வகங்கள் ஒரு குறிப்பிட்ட மரபணுவை சோதிக்க ஒரே ஜோடி ப்ரைமர்களைப் பயன்படுத்துகின்றன.காலப்போக்கில், ஆய்வக இடத்தில் அதிக அளவு PCR தயாரிப்பு மாசுபாடு ஏற்படும்.அத்தகைய மாசு ஏற்பட்டால், குறுகிய காலத்தில் அதை அகற்றுவது கடினம்.

முதல் மூன்று வகையான மாசுபாடுகளுக்கு, நாம் பயனுள்ள வழிகளைத் தவிர்க்கலாம், ஆனால் PCR தயாரிப்புகளால் ஏற்படும் மாசுபாட்டைத் தடுப்பது கடினம், குறிப்பாக தரமற்ற PCR ஆய்வகங்களின் கட்டுமானத்தில்.PCR செயல்பாட்டில், குழாய் முனை உறிஞ்சி திரவத்தை வீசும் போது, ​​PCR குழாய் கவர் திறக்கப்படும் போது, ​​ஒரு ஏரோசல் உருவாகும்.ஏரோசால் கொண்டு செல்லும் டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகள் (ஒரு ஏரோசல் பல்லாயிரக்கணக்கான டிஎன்ஏவை சுமந்து செல்லும்) காற்றில் மிதப்பதால் அகற்றுவது கடினம்.அடுத்த சுற்று PCR சோதனைகள் அறிமுகப்படுத்தப்பட்டவுடன், தவறான நேர்மறைகள் தவிர்க்க முடியாமல் ஏற்படும்.

கீழே உள்ள படத்தில் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, எதிர்மறைக் கட்டுப்பாடும் தொடர்புடைய ஆர்வத்தை பெருக்கியது:

1.6

PCR மாசுபாடு மற்றும் தடுப்பு இந்த பிரச்சினையின் முதல் பகுதி இங்கே அறிமுகப்படுத்தப்பட்டுள்ளது.அடுத்த இதழ் "பிசிஆர் தயாரிப்பு மாசுபாட்டைத் தடுப்பது" என்ற இரண்டாம் பகுதியை உங்களுக்குக் கொண்டு வரும், எனவே காத்திருங்கள்!


இடுகை நேரம்: ஜூலை-25-2017