ஆசிரியர்கள்: வாங் சியோயன், ஜாவோ எரியு

பிரிவு: ஜியாஜோ மருத்துவமனை, டோங்பாங் மருத்துவமனை டோங்ஜி பல்கலைக்கழகத்துடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளது

தற்போது, ​​சுவாச நோய்க்கிருமி நியூக்ளிக் அமிலத்தைக் கண்டறிவதற்கான முக்கிய மாதிரி வகை தொண்டை துடைப்பாகும்.பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் பல வகையான மாதிரிப் பாதுகாப்புத் தீர்வுகள் உள்ளன, இவை அனைத்தும் போக்குவரத்து மற்றும் சேமிப்பிற்காக குளிரூட்டப்பட வேண்டும் அல்லது உறைந்திருக்க வேண்டும்;சேகரிப்பு மற்றும் போக்குவரத்து செயல்முறையின் போது குறைந்த வெப்பநிலையின் முழு செயல்முறையையும் கட்டுப்படுத்துவது கடினம், மேலும் மாதிரி சோதனைக்கு முன் தரக் கட்டுப்பாட்டை உறுதி செய்வது கடினம்.^[1-2].

RNase (RNase) என்பது ஒரு எண்டோநியூக்லீஸ் ஆகும், இது ஆர்என்ஏவை ஹைட்ரோலைஸ் செய்கிறது, முக்கியமாக நியூக்ளியோடைடுகளுக்கு இடையேயான பாஸ்போடைஸ்டர் பிணைப்புகளைத் துண்டிக்கிறது.RNase மூலக்கூறு மிகவும் நிலையானது, கட்டமைப்பில் டிசல்பைட் பிணைப்புகள் உள்ளன, மேலும் அதன் செயல்பாட்டிற்கு இருவேலக் கேஷன்கள் தேவைப்படாது, எனவே RNase எளிதில் சிதைக்கப்படுவதில்லை, மேலும் அதிக வெப்பநிலை அல்லது டெனாட்டரண்டுகளின் பயன்பாட்டிற்குப் பிறகும் கூட இது மீண்டும் உருவாக்க எளிதானது.RNases எண்டோஜெனஸ் மற்றும் வெளிப்புறமாக பிரிக்கப்படுகின்றன.உயிரணுக்கள் சிதைக்கப்படும் அதே நேரத்தில் எண்டோஜெனஸ் RNases வெளியிடப்படலாம்.எனவே, RNA பிரித்தெடுக்கும் செயல்பாட்டில் எண்டோஜெனஸ் RNases இன் பங்கை நீக்குவது மிகவும் முக்கியமான படியாகும்.வெளிப்புற RNaseகள் பரவலாக விநியோகிக்கப்படுகின்றன.காற்று, மனித தோல், முடி மற்றும் உமிழ்நீர் ஆகியவற்றில் RNaseகள் உள்ளன, இவை RNA எளிதில் சிதைவதற்கு முக்கிய காரணங்களாகும்.^[3].

தரவு வினவல்

CANS-CL02-A009 "மூலக்கூறு கண்டறிதல் துறையில் மருத்துவ ஆய்வகத் தரம் மற்றும் திறன் அங்கீகார வழிகாட்டுதல்களின் பயன்பாடு" தொழில்நுட்பத் தேவைகளில் பயன்பாட்டிற்கு ஏற்ப பொருத்தமான நீர் தர தரநிலைகள் உருவாக்கப்பட வேண்டும் என்று முன்மொழிகிறது;காற்று புகாத கொள்கலன்கள்:

RNase/வகைப்படுத்தல்

(1) ஆர்.நேஸ் ஏ

ரிபோநியூக்லீஸ் A (RNase A), போவின் கணையத்தில் இருந்து பெறப்பட்டது, இது ஒரு எண்டோரிபோநியூக்லீஸ் ஆகும், இது குறிப்பாக ஆர்என்ஏவில் உள்ள பைரிமிடின் எச்சங்களின் 3′ முனையைத் தாக்கக்கூடியது, சைட்டோசின் அல்லது யூராசிலை வெட்டுகிறது.3′ பைரிமிடின் நியூக்ளியோடைடு மற்றும் இறுதியில் 3′ பைரிமிடின் நியூக்ளியோடைடு கொண்ட ஒலிகோநியூக்ளியோடைடு, வினையின் இறுதி விளைபொருளான பாஸ்போடைஸ்டர் பிணைப்பு.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) ஆனது Aspergillus orjzae இலிருந்து பெறப்பட்டது, இது குறிப்பாக குவானைனின் 3′-டெர்மினல் பாஸ்பேட்டில் செயல்படுகிறது, மேலும் பிளவு தளமானது குவானைனின் 3′ பாஸ்பேட்டிற்கும் அருகிலுள்ள நியூக்ளியோடைடுகளின் 5′ ஹைட்ராக்சைலுக்கும் இடையில் உள்ளது.வினையின் இறுதி விளைபொருளானது 3′குவானிலிக் அமிலம் மற்றும் ஒலிகோநியூக்ளியோடைடு துண்டுகள் மற்றும் இறுதியில் 3′குவானிலிக் அமிலம் ஆகும்.

(3) ஆர்.நேஸ் எச்

Ribonuclease H (RNase H) முதன்முதலில் கன்று தைமஸ் திசுக்களில் இருந்து கண்டுபிடிக்கப்பட்டது, மேலும் அதன் குறியாக்க மரபணு எஸ்கெரிச்சியா கோலியில் குளோன் செய்யப்பட்டது.இது குறிப்பாக டிஎன்ஏவை சிதைக்கும்: ஆர்என்ஏ ஹைப்ரிட் டூப்ளெக்ஸில் உள்ள ஆர்என்ஏ இழைகள், ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகள் மற்றும் மோனோநியூக்ளியோடைடுகள் 3′-OH மற்றும் 5′-மோனோபாஸ்பேட் முனைகளுடன் உருவாகின்றன, இது ஒற்றை அல்லது இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏவை சிதைக்க முடியாது.

RNase

செயல்பாடு மற்றும் பயன்பாடு

ரிபோநியூக்லீஸ் ரைபோநியூக்ளிக் அமிலத்தின் (ஆர்என்ஏ) சிதைவை ஊக்குவிக்கும் மற்றும் செயற்கையாக ஒருங்கிணைக்க முடியும்.காயம் மற்றும் மூட்டு வலிக்கு சிகிச்சையளிக்க மருத்துவ களிம்பு பயன்படுத்தப்படுகிறது.அறிக்கைகளின்படி, ரிபோநியூக்லீஸ் ஹோஸ்ட் செல் வளர்சிதை மாற்றத்தை மாற்றும், வைரஸ் தொகுப்பைத் தடுக்கும், விட்ரோவில் இன்ஃப்ளூயன்ஸா வைரஸின் பெருக்கத்தைத் தடுக்கும் மற்றும் கோழி கருக்களில் தடுப்பூசி மற்றும் ஹெர்பெஸ் வைரஸ் உருவாவதைத் தடுக்கிறது.ரைபோநியூக்லீஸ் தினசரி இன்ட்ராமுஸ்குலர் இன்ஜெக்ஷன் 180 மி.கி இன் மருத்துவப் பயன்பாடு, தொற்றுநோய் என்செபாலிடிஸ் சிகிச்சைக்கு நன்மை பயக்கும், ரிபோநியூக்லீஸ் ரிபோநியூக்ளிக் அமிலத்தின் (ஆர்என்ஏ) சிதைவை ஊக்குவிக்கும், மேலும் இப்போது செயற்கையாக ஒருங்கிணைக்கப்படலாம்.காயம் மற்றும் மூட்டு வலிக்கு சிகிச்சையளிக்க மருத்துவ களிம்பு பயன்படுத்தப்படுகிறது.அறிக்கைகளின்படி, ரிபோநியூக்லீஸ் ஹோஸ்ட் செல் வளர்சிதை மாற்றத்தை மாற்றும், வைரஸ் தொகுப்பைத் தடுக்கும், விட்ரோவில் இன்ஃப்ளூயன்ஸா வைரஸின் பெருக்கத்தைத் தடுக்கும் மற்றும் கோழி கருக்களில் தடுப்பூசி மற்றும் ஹெர்பெஸ் வைரஸ் உருவாவதைத் தடுக்கிறது.ரைபோநியூக்லீஸின் மருத்துவப் பயன்பாடு, 180 மில்லிகிராம் இன்ட்ராமுஸ்குலர் ஊசியை தினசரி உட்கொள்வது தொற்றுநோய் என்செபாலிடிஸ் சிகிச்சைக்கு நன்மை பயக்கும்.

RNase

தடுப்பான் வரையறை

RNase இன்ஹிபிட்டர் அலகு வரையறை: 5ng RNase A இன் 50% செயல்பாட்டைத் தடுக்கத் தேவையான நொதியின் அளவு ஒரு அலகு ஆகும்.

RNase தடுப்பான்கள் எவ்வாறு வேலை செய்கின்றன

குவானிடின் ஐசோதியோசயனேட்:

குவானிடைன் ஐசோதியோசயனேட் என்பது C2H6N4S என்ற மூலக்கூறு வாய்ப்பாடு கொண்ட ஒரு கரிம சேர்மமாகும்.முக்கியமாக உயிரியல் மருத்துவம், இரசாயன எதிர்வினைகள் போன்றவற்றில் பயன்படுத்தப்படுகிறது. குவானிடைன் ஐசோதியோசயனேட் ஒரு புரத லைசிங் ஏஜென்ட் ஆகும், மேலும் இது பெரும்பாலும் மூலக்கூறு கண்டறியும் எதிர்வினைகளில் லிசிஸ் கரைசலின் முக்கிய அங்கமாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.இது திசுக்களை லைஸ் செய்யலாம், செல் கட்டமைப்பை அழிக்கலாம் மற்றும் நியூக்ளியோபுரோட்டீனில் இருந்து நியூக்ளிக் அமிலத்தை பிரிக்கலாம் மற்றும் RNase க்கு வலுவான டினாட்டரேஷன் உள்ளது.இது தற்போது மிகவும் பயனுள்ள RNase தடுப்பானாகும்.

TRIzol என்பது ஒரு புதிய மொத்த ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கும் மறுஉருவாக்கமாகும், இது செல்கள் அல்லது திசுக்களில் இருந்து மொத்த ஆர்என்ஏவை நேரடியாக பிரித்தெடுக்க முடியும்.இது பீனால் மற்றும் குவானிடைன் ஐசோதியோசயனேட் போன்ற பொருட்களைக் கொண்டுள்ளது, இது செல்களை விரைவாக சீர்குலைக்கும் மற்றும் செல்கள் வெளியிடும் நியூக்லீஸைத் தடுக்கும்.

(இருப்பினும், குவானிடின் ஐசோதியோசயனேட் ஆய்வக ஆராய்ச்சியாளர்களின் ஆரோக்கியத்திற்கு ஆபத்தானது.)

RNasin:

எலி கல்லீரல் அல்லது மனித பிளாஸ்டோடெர்மில் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்ட அமில கிளைகோபுரோட்டீன்.Rnasin என்பது RNase இன் போட்டியற்ற தடுப்பானாகும், இது பல்வேறு RNaseகளை செயலிழக்கச் செய்ய பிணைக்க முடியும்.

(மேலும் விவரங்கள்:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hஅதிக வெப்பநிலை:

அதிக வெப்பநிலை என்பது புரதத்தை குறைப்பதற்கான பொதுவான வழிமுறையாகும்.

டைதைல்பைரோகார்பனேட் (DEPC):

DEPC என்பது ஒரு வலுவான ஆனால் முழுமையற்ற RNase தடுப்பானாகும், இது RNase செயலில் உள்ள குழுவின் அமினோ அமிலம் இமிடாசோல் வளையத்துடன் இணைந்து புரதங்களைக் குறைப்பதன் மூலம் RNase செயல்பாட்டைத் தடுக்கும்.

வனாடில் ரிபோநியூக்ளியோசைடு வளாகம்:

வெனடியம் ஆக்சைடு அயனிகள் மற்றும் நியூக்ளியோசைடுகளால் உருவாக்கப்பட்ட ஒரு சிக்கலானது, இது RNase உடன் மாற்றும் பொருட்களின் வடிவத்தில் பிணைக்கிறது, இது RNase இன் செயல்பாட்டை முற்றிலும் தடுக்கிறது.

மற்றவை:

SDS, யூரியா, டயட்டோமேசியஸ் எர்த் போன்றவையும் RNase இல் ஒரு குறிப்பிட்ட தடுப்பு விளைவைக் கொண்டிருக்கின்றன.

நிபுணர் விமர்சனங்கள்

லி யுஜி தலைமை தொழில்நுட்ப வல்லுநர்

ஆய்வகத் துறை இயக்குநர், ஜியாஜோ மருத்துவமனை, டாங்பாங் மருத்துவமனை, டோங்ஜி பல்கலைக்கழகத்துடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளது

வெளிப்புற RNase இன் மக்கும் தன்மையைத் தடுக்க, முகமூடிகள், கையுறைகள் மற்றும் தொப்பிகளை ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கும் போது அடிக்கடி அணிந்து மாற்ற வேண்டும்.அனைத்து கண்ணாடிப் பொருட்களையும் உலர்த்தும் அடுப்பில் 200 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 2 மணி நேரத்திற்கும் மேலாக சுட வேண்டும்.பேக்கிங்கிற்குப் பயன்படுத்தப்படும் பிளாஸ்டிக் போன்ற பொருட்கள், DEPC நீரில் சுத்திகரிக்கப்பட வேண்டும், பின்னர் காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் கழுவ வேண்டும்.ஆர்என்ஏவை பிரித்தெடுத்தல், பாதுகாத்தல் மற்றும் அடையாளம் காண பயன்படுத்தப்படும் எதிர்வினைகள் அல்லது சாதனங்கள் ஆர்என்ஏவுக்கு அர்ப்பணிக்கப்பட வேண்டும், மேலும் ஒரு சுயாதீன ஆர்என்ஏ செயல்பாட்டு பகுதி அமைக்கப்பட வேண்டும்.

குறிப்புகள்:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, மற்றும் பலர்.ஆஸ்திரேலிய பழங்குடியின குழந்தைகளில் [J] கடுமையான குறைந்த சுவாச நோய்த்தொற்றுகள் ஏற்படுவதற்கு உடனடியாக நாசோபார்னக்ஸில் பாக்டீரியா மற்றும் வைரஸ்கள்.Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] சீன தடுப்பு மருந்து சங்கத்தின் மருத்துவமனை தொற்று கட்டுப்பாட்டு பிரிவு.மருத்துவ நுண்ணுயிர் மாதிரிகள் [J] சேகரிப்பு மற்றும் ஆய்வுக்கான வழிகாட்டுதல்கள்.சீன ஜர்னல் ஆஃப் ஹாஸ்பிடல் இன்ஃபெக்ஷன், 2018(20):3192-3200.

[3] “மருத்துவ சோதனை பத்தாயிரம் ஏன் மூலக்கூறு உயிரியல் சோதனை தொகுதி”