சிக்கல் பகுப்பாய்வு வழிகாட்டி

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

குறைந்த மகசூல் அல்லது டிஎன்ஏ இல்லை

மாதிரியின் ஆதாரம், மாதிரியின் வயது, மாதிரியின் சேமிப்பு நிலைகள் மற்றும் செயல்பாடு உட்பட, மரபணு DNAவின் விளைச்சலைப் பாதிக்கும் பல காரணிகள் பொதுவாக உள்ளன.

பிரித்தெடுக்கும் போது மரபணு டிஎன்ஏவைப் பெற முடியவில்லை

1. திசு மாதிரிகள் முறையற்ற முறையில் சேமித்து வைக்கப்படுகின்றன அல்லது அதிக நேரம் சேமித்து வைக்கப்படுகின்றன, இதன் விளைவாக மரபணு DNA சிதைகிறது.

பரிந்துரை: திசு மாதிரிகளை திரவ நைட்ரஜன் அல்லது -20 இல் சேமிக்கவும்°சி;மரபணு DNA பிரித்தெடுப்பதற்கு புதிதாக சேகரிக்கப்பட்ட மாதிரிகளைப் பயன்படுத்த முயற்சிக்கவும்.

2. மிகக் குறைவான மாதிரி அளவு, தொடர்புடைய மரபணு DNA பிரித்தெடுக்கப்படாமல் போகலாம்.

பரிந்துரை: நீண்ட காலமாக சேமித்து வைக்கப்பட்டுள்ள அல்லது கடுமையான மரபணு டிஎன்ஏ சிதைவைக் கொண்ட திசு மாதிரிகளுக்கு, கணிசமான மரபணு டிஎன்ஏவைப் பிரித்தெடுப்பதற்காக திசு மாதிரிகளின் அளவை சரியான முறையில் அதிகரிக்கலாம்.மாதிரியின் அளவை DNA தேவைகளுக்கு ஏற்ப தீர்மானிக்க முடியும், ஆனால் புதிய மாதிரி 100mg ஐ விட அதிகமாக இருக்கக்கூடாது, உலர் மாதிரி 30mg ஐ விட அதிகமாக இருக்கக்கூடாது.

3. மாதிரியானது திரவ நைட்ரஜனுடன் அரைக்கப்படவில்லை அல்லது திரவ நைட்ரஜனுக்குப் பிறகு அதிக நேரம் வைக்கப்படவில்லை.

பரிந்துரை: டிஎன்ஏ பிரித்தெடுக்கும் போது, ​​செல் சுவரை உடைக்க மாதிரியை திரவ நைட்ரஜனுடன் முழுமையாக அரைக்க வேண்டும்;அரைத்த பிறகு, மாதிரி பொடியை 65 க்கு முன்கூட்டியே சூடேற்றப்பட்ட PL1 க்கு மாற்றவும்°C முடிந்தவரை சீக்கிரம் (அரைத்த தூள் உருகியவுடன், மரபணு DNA விரைவாக சிதையத் தொடங்கும்) .

4. Foregene Protease ன் முறையற்ற சேமிப்பக செயல்பாடு குறைக்கப்பட்டது அல்லது செயலிழக்கச் செய்கிறது.

பரிந்துரை: Foregene Protease இன் சேமிப்பக நிலைமைகளை உறுதிப்படுத்தவும் அல்லது நொதி நீராற்பகுப்புக்கான புதிய Foregene Protease உடன் மாற்றவும்.

5. கிட் தவறாக சேமிக்கப்படுகிறது அல்லது அதிக நேரம் சேமிக்கப்படுகிறது, இதனால் கிட்டில் உள்ள சில கூறுகள் தோல்வியடையும்.

பரிந்துரை: தொடர்புடைய செயல்பாடுகளுக்கு புதிய தாவர மரபணு டிஎன்ஏ பிரித்தெடுக்கும் கருவியை வாங்கவும்.

6. கிட் தவறான பயன்பாடு.

பரிந்துரை: தாவர மரபணு டிஎன்ஏவை பிரித்தெடுப்பதற்கும் சுத்திகரிப்பதற்கும் மாதிரிகளுக்கு அர்ப்பணிக்கப்பட்ட தாவர டிஎன்ஏ தனிமைப்படுத்தல் கருவியை வாங்கவும்.

7. ஒரு சேர்க்காமல் தாங்கல் WBநீரற்ற எத்தனால்.

பரிந்துரை: Buffer WB இல் முழுமையான எத்தனாலின் சரியான அளவைச் சேர்ப்பதை உறுதிசெய்யவும்.

8. சிலிக்கா சவ்வு மீது எலுயன்ட் சரியாக சொட்டப்படவில்லை.

பரிந்துரை: 65 இல் முன் சூடேற்றப்பட்ட எலுவெண்டைச் சேர்க்கவும்℃சிலிக்கா ஜெல் மென்படலத்தின் நடுவில் துளியாகச் சென்று, எலுஷன் செயல்திறனை அதிகரிக்க அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்கள் விடவும்.

குறைந்த மகசூல் மரபணு டிஎன்ஏ பெற பிரித்தெடுத்தல்

1. மாதிரி தவறாக சேமிக்கப்படுகிறது அல்லது நீண்ட நேரம் சேமிக்கப்படுகிறது, இதன் விளைவாக மரபணு DNA சிதைகிறது.

பரிந்துரை: திசு மாதிரிகளை -20 இல் சேமிக்கவும்℃;மரபணு DNA பிரித்தெடுப்பதற்கு புதிதாக சேகரிக்கப்பட்ட திசு மாதிரிகளைப் பயன்படுத்த முயற்சிக்கவும்.

2. திசு மாதிரிகளின் அளவு மிகவும் சிறியதாக இருந்தால், பிரித்தெடுக்கப்பட்ட மரபணு DNA குறைவாக இருக்கும்.

பரிந்துரை: சில தாவர மாதிரிகள் நீர்ச்சத்து நிறைந்த ஆல்கா போன்ற நீர்வாழ் தாவரங்கள் போன்றவை, மருந்தின் அளவை சரியான முறையில் அதிகரிக்கலாம் அல்லது அறுவை சிகிச்சைக்கு முன் தண்ணீரை சிறிது நீரிழப்பு செய்யலாம்.

3. மாதிரிகள் திரவ நைட்ரஜனுடன் முழுமையாக அரைக்கப்படவில்லை அல்லது அரைத்த பிறகு அதிக நேரம் அறை வெப்பநிலையில் விடப்பட்டது.

பரிந்துரை: திரவ நைட்ரஜன் அரைத்தல் போதுமானதாக இருக்க வேண்டும், மேலும் மாதிரி செல் சுவர் முடிந்தவரை உடைக்கப்பட வேண்டும்;அரைத்த உடனேயே மாதிரி பொடியை 65க்கு மாற்ற வேண்டும்℃அடுத்த கட்டத்திற்கு முன் சூடாக்கப்பட்ட பஃபர் PL1.

4. சரியான கிட் பயன்படுத்தாதது.

பரிந்துரை: தாவர மரபணு டிஎன்ஏவை பிரித்தெடுத்து சுத்திகரிக்க ஒரு பிரத்யேக தாவர டிஎன்ஏ ஐசோலேஷன் கிட் பயன்படுத்தவும்.

5. Foregene Protease இன் முறையற்ற சேமிப்பு, செயல்பாடு குறைக்கப்பட்ட அல்லது செயலிழக்கச் செய்கிறது.

பரிந்துரை: Foregene Protease இன் சேமிப்பக நிலைமைகளை உறுதிப்படுத்தவும் அல்லது நொதி நீராற்பகுப்புக்கான புதிய Foregene Protease உடன் மாற்றவும்.

6. எலுவென்ட் பிரச்சனை

பரிந்துரை: தயவு செய்து நீக்குவதற்கு Buffer EB ஐப் பயன்படுத்தவும்;ddH ஐப் பயன்படுத்தினால்₂O அல்லது மற்ற எலுயண்டுகள், எலுயண்டின் pH 7.0-8.5 க்கு இடையில் இருப்பதை உறுதிசெய்யவும்.

7. எலுயன்ட் சரியாக சொட்டப்படவில்லை

பரிந்துரை: எலுஷன் துளியை சிலிக்கா மென்படலத்தின் நடுவில் சேர்த்து அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்கள் விடவும்.

8. எலுவெண்ட் வால்யூம் மிகவும் சிறியது

பரிந்துரை: குறைந்தபட்சம் 100க்குக் குறையாமல், அறிவுறுத்தல்களின்படி மரபணு டிஎன்ஏ எலுஷனுக்கு எலுயண்டைப் பயன்படுத்தவும்μl.

குறைந்த தூய்மையுடன் பிரித்தெடுக்கப்பட்ட மரபணு டிஎன்ஏ

மரபணு DNAவின் குறைந்த தூய்மையானது கீழ்நிலை சோதனைகளின் தோல்வி அல்லது மோசமான விளைவுக்கு வழிவகுக்கும், அதாவது: நொதியை வெட்ட முடியாது, மற்றும் இலக்கு மரபணு பகுதியை PCR மூலம் பெற முடியாது.

1. இதர புரத மாசுபாடு, ஆர்என்ஏ மாசுபாடு.

பகுப்பாய்வு: பஃபர் PW நெடுவரிசையை கழுவ பயன்படுத்தப்படவில்லை;நெடுவரிசையை சரியான மையவிலக்கு வேகத்தில் கழுவுவதற்கு Buffer PW பயன்படுத்தப்படவில்லை.

பரிந்துரை: பத்தியின் வழியாக சூப்பர்நேட்டன்ட் கடந்து செல்லும் போது, ​​மேல்நிலையில் மழைப்பொழிவு இல்லை என்பதை உறுதிப்படுத்த முயற்சிக்கவும்;அறிவுறுத்தல்களின்படி சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையை பஃபர் PW உடன் கழுவுவதை உறுதிப்படுத்திக் கொள்ளுங்கள், மேலும் இந்த படிநிலையைத் தவிர்க்க முடியாது.

2. தூய்மையற்ற அயன் மாசுபாடு.

பகுப்பாய்வு: பஃபர் WB வாஷ் நெடுவரிசை தவிர்க்கப்பட்டது அல்லது ஒரு முறை மட்டுமே கழுவப்பட்டது, இதன் விளைவாக எஞ்சிய அயனி மாசுபாடு ஏற்பட்டது.

பரிந்துரை: எஞ்சியிருக்கும் அயனிகளை முடிந்தவரை அகற்றுவதற்கான வழிமுறைகளின்படி Buffer WB மூலம் இரண்டு முறை கழுவ வேண்டும்.

3. RNase மாசுபாடு.

பகுப்பாய்வு: எக்ஸோஜெனஸ் ஆர்நேஸ் பஃபரில் சேர்க்கப்பட்டது;Buffer PW இல் தவறான சலவைச் செயல்பாடு எஞ்சிய RNaseஐ ஏற்படுத்தும் மற்றும் விட்ரோ டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் போன்ற கீழ்நிலை RNA சோதனை செயல்பாடுகளை பாதிக்கும்.

பரிந்துரை: ஃபோர்ஜீன் தொடர் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கும் கருவிகள் கூடுதல் RNase இல்லாமல் RNA ஐ அகற்றலாம், மேலும் தாவர DNA தனிமைப்படுத்தல் கருவியில் உள்ள அனைத்து வினைகளுக்கும் RNase தேவையில்லை;அறிவுறுத்தல்களின்படி சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையை பஃபர் PW உடன் கழுவுவதை உறுதிப்படுத்திக் கொள்ளுங்கள், மேலும் இந்த படிநிலையைத் தவிர்க்க முடியாது.

4. எத்தனால் எச்சங்கள்.

பகுப்பாய்வு: பஃபர் WB மூலம் சுத்திகரிப்பு நெடுவரிசையைக் கழுவிய பிறகு, வெற்று குழாய் மையவிலக்கு எதுவும் செய்யப்படவில்லை.

பரிந்துரை: சரியான வெற்று குழாய் மையவிலக்குக்கான வழிமுறைகளைப் பின்பற்றவும்.

கற்பிப்பு கையேடு:

தாவர டிஎன்ஏ ஐசோலேஷன் கிட் அறிவுறுத்தல் கையேடு