• முகநூல்
  • இணைக்கப்பட்ட
  • வலைஒளி

பாரம்பரிய தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ்கள் அதிக வெப்பநிலையை பொறுத்துக்கொள்ள முடியாது (MMLV செயல்பாட்டிற்கான உகந்த வெப்பநிலை 37-50 ° C, மற்றும் AMV 42-60 ° C ஆகும்).மிகவும் சிக்கலான வைரஸ் ஆர்என்ஏவை குறைந்த வெப்பநிலையில் சிடிஎன்ஏவாக மாற்ற முடியாது, இதன் விளைவாக கண்டறிதல் திறன் குறைகிறது.பாரம்பரிய RT-qPCR க்கு பொதுவாக இரண்டு முக்கிய நொதிகளின் (ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் மற்றும் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்) பங்கு தேவைப்படுகிறது, இது எதிர்வினை அமைப்பின் செயல்பாட்டை எளிதாக்குவது மற்றும் செலவைக் குறைப்பது சாத்தியமற்றது.TtH மற்றும் RevTaq ஆகிய இரண்டு உயர் வெப்பநிலை-எதிர்ப்பு தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ்களை இங்கே அறிமுகப்படுத்துவோம்.இந்த இரண்டு என்சைம்களும் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸின் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளன, எனவே அவை பைஃபங்க்ஸ்னல் என்சைம்கள் என்று அழைக்கப்படுகின்றன.

TtH டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்

தெர்மோபிலிக் பாக்டீரியமான தெர்மஸ் தெர்மோபிலஸ் HB8 இலிருந்து பெறப்பட்ட TtH பற்றி நீங்கள் கேள்விப்பட்டிருப்பீர்கள்.Mg2+ போன்ற டைவலன்ட் கேஷன்களின் முன்னிலையில், அது டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது.இது Taq என்சைம் போன்ற PCR எதிர்வினைகளில் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது, ஆனால் இது Taq நொதியை விட அதிக வெப்ப எதிர்ப்பைக் கொண்டுள்ளது, எனவே இது உயர் GC உள்ளடக்க டெம்ப்ளேட்களுடன் PCR இல் சிறந்த விளைவைக் கொண்டுள்ளது.

இந்த நொதி அடிப்படையில் 3′→5′ எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாடு மற்றும் 5′→3′ எக்ஸோநியூக்லீஸ் செயல்பாடு ஆகியவற்றைக் கொண்டிருக்கவில்லை, எனவே இது டியோக்சி சீக்வென்சிங்கிற்கும் பயன்படுத்தப்படலாம்.

· இந்த நொதி RTase செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளது.Mn2+ முன்னிலையில், RTase செயல்பாடு மேம்படுத்தப்படும்.இந்த அம்சத்தைப் பயன்படுத்தி, ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ரியாக்ஷன் மற்றும் பிசிஆர் வினையை ஒரே குழாயில், அதாவது ஒரு-படி ஆர்டி-பிசிஆர் செய்ய இதைப் பயன்படுத்தலாம்.இருப்பினும், Mn2+ முன்னிலையில், RT-PCR இன் துல்லியம் அதிகமாக இல்லை.RT செயல்பாட்டிற்கும் rnaase H செயல்பாட்டிற்கும் எந்த தொடர்பும் இல்லை.

· Tth-DNA பாலிமரேஸின் அதிகரித்த செயல்பாடு (pH9, உகந்த +55℃~+70℃, அதிகபட்சம் +95℃) ஆர்என்ஏ இரண்டாம் கட்டமைப்பால் ஏற்படும் பிரச்சனைகளை சமாளிக்கிறது.இதன் விளைவாக வரும் சிடிஎன்ஏவை எம்ஜி2+ அயனிகளின் முன்னிலையில் அதே என்சைம் மூலம் பிசிஆர் மூலம் பெருக்க முடியும்.

· Tth-DNA பாலிமரேஸின் திறனானது ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் டிஎன்ஏ பெருக்கத்தை அதிக வெப்பநிலையில் செய்வதால், இந்த நொதியை செல்லுலார் மற்றும் வைரஸ் ஆர்என்ஏவின் அளவு RT-PCR, குளோனிங் மற்றும் மரபணு வெளிப்பாடு பகுப்பாய்விற்கு பயனுள்ளதாக ஆக்குகிறது.
· Tth-DNA பாலிமரேஸ் RT-PCRக்கு ஆர்என்ஏவை 1kb வரை பெருக்கப் பயன்படுகிறது.

ஏதுமில்லை
 

அம்சங்கள் மற்றும் நன்மைகள்

Tth DNA பாலிமரேஸ்:

• RT-PCR எதிர்வினையில் குறைந்தபட்சம் 1000 bp, உகந்த பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை (PCR) தயாரிப்பு அளவை உறுதிப்படுத்தவும்

• மாற்றியமைக்கப்பட்ட டியோக்சிரைபோநியூக்ளியோசைட் ட்ரைபாஸ்பேட்டை அடி மூலக்கூறாக ஏற்றுக்கொள்ளுங்கள்

• RNase H செயல்பாட்டுடன் தொடர்புடையது அல்ல

• பொதுவாக ஆர்என்ஏவில் இருக்கும் உயர் இரண்டாம் நிலை அமைப்புடன் தொடர்புடைய பிரச்சனைகளை சமாளிக்க அதிக வெப்ப நிலைத்தன்மை உள்ளது

RevTaq RT-PCR டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்

ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் செயல்பாடு கொண்ட வெப்ப-எதிர்ப்பு டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ்

RevTaq-RT-PCR-DNA பாலிமரேஸ் என்பது ஒரு பொறிக்கப்பட்ட, அதிக வெப்ப-எதிர்ப்பு, இரட்டை-செயல்பாட்டு என்சைம் ஆகும், இது ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் மற்றும் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் செயல்பாடுகளுடன் இயக்கிய மற்றும் செயற்கையான பரிணாம வளர்ச்சியின் மூலம் பெறப்படுகிறது.

· 95°C இல் உள்ள RevTaq RT-PCR DNA பாலிமரேஸின் அரை-வாழ்க்கை 40 நிமிடங்களுக்கும் அதிகமாகும்.

· ரெவ்டாக் ஆர்டி-பிசிஆர் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட்டிலிருந்து நேரடியாக உயர்-வெப்பநிலை தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனை அனுமதிக்கிறது, மேலும் சிடிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்களை உருவாக்க ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் படியை பலமுறை மீண்டும் செய்யலாம்.

· RevTaq RT-PCR DNA பாலிமரேஸ் "ஜீரோ-ஸ்டெப்" RT-PCR (ஐசோதெர்மல் ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் படி இல்லை) அனுமதிக்கிறது, ஏனெனில் சுழற்சி PCR நீட்டிப்பு படியில், தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் டிஎன்ஏ பெருக்கம் ஒரே நேரத்தில் நிகழ்கிறது.இது உயர் வெப்பநிலையில் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் வினையை ஊக்குவிக்கிறது, இதன் மூலம் அதிக வெப்பநிலையில் ஆர்என்ஏவில் உள்ள வலுவான இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்பை உருகுவதில் ஏற்படும் சிக்கல்களைக் குறைக்கிறது.

· அப்டாமர் அடிப்படையிலான ஹாட்-ஸ்டார்ட் ஃபார்முலா காரணமாக, ரெவ்டாக் ஆர்டி-பிசிஆர் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ், அனீலிங் மற்றும் நீட்டிப்பு வெப்பநிலை 57 டிகிரி செல்சியஸ் அதிகமாக இருக்கும்போது சிறந்த முடிவுகளைத் தரும்.

· நொதி வெப்ப-எதிர்ப்புத் திறன் கொண்டதாக இருப்பதால், ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஆய்வுகளை மிக அதிக உருகுநிலையுடன் (>60°C) வடிவமைக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

எதிர்வினை அமைவு செயல்பாட்டின் போது வெப்பநிலை சாய்வு மூலம் அனீலிங்/நீட்டிப்பு படியின் வெப்பநிலையை மேம்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.

· அதிக வெப்பநிலை, PCR இன் தனித்தன்மை அதிகமாகும்.டிஎன்ஏ ப்ரைமர்:ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட் கலப்பினமானது பொதுவாக டிஎன்ஏ ப்ரைமர்:சிடிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட் டூப்ளெக்ஸை விட அதிக உருகும் புள்ளியைக் கொண்டிருப்பதால், ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் சுழற்சி பொதுவாக பிசிஆர் சுழற்சியை விட அதிக வெப்பநிலையில் செய்யப்படுகிறது.

· RevTaq RT-PCR DNA பாலிமரேஸ் மரபணு ரீதியாக வடிவமைக்கப்பட்டு மேம்படுத்தப்பட்டது, மேலும் ஆம்ப்ளிகான் அளவு 60-300 bp க்கு இடையில் உள்ளது.

RevTaq RT-PCR DNA பாலிமரேஸ் கண்டறிதல் வரம்பு 4 பிரதிகள்/இரண்டு (2)

உகந்த எதிர்வினை அமைப்பு (உயர் உருகும் புள்ளி ப்ரைமர்களை நிறுவுதல்) படத்தில் காட்டப்பட்டுள்ளது.RevTaq RT-PCR DNA பாலிமரேஸ்-உந்துதல் RT-PCR ஆனது TaqPath 1-படி RT-qPCR மாஸ்டர் கலவையை விட சிறந்த உணர்திறனைக் காட்டுகிறது, மேலும் குறைந்த கண்டறிதல் மாதிரி நீர்த்த சாய்வு.

மேலும் நன்மைகள்:

விரைவு தொடக்க செயல்பாடு → ஆரம்ப வெப்ப குறைப்பு படி தவிர்க்கப்படலாம்.

ஹாட்-ஸ்டார்ட் ஆப்டாமர் ஃபார்முலா → உடனடியாக 100% என்சைம் செயல்பாட்டை வழங்கவும் மற்றும் குறைந்த வெப்பநிலையில் (<57°C) குறிப்பிடப்படாத பெருக்கத்தைத் தடுக்கவும்.

பிளவு செயல்பாடு → RNA பிரித்தெடுத்தல் படி தவிர்க்கப்பட்டது, ஏனெனில் RevTaq RT-PCR DNA பாலிமரேஸ் கச்சா எதிர்வினை மாதிரிகளையும் செயலாக்க முடியும்.இது சூடான RT-PCR சுழற்சியில் யூகாரியோட்கள், பாக்டீரியா மற்றும் வைரஸ்களின் செல் சவ்வுகளை உடனடியாக அழிக்க முடியும்.

IVD மூலப்பொருள் நிலை → உயர்தர தரநிலைகள் மற்றும் மிகவும் போட்டி விலைகள்


இடுகை நேரம்: ஆகஸ்ட்-12-2021