என் மனதில் கண்டறிதல் தொழில்நுட்பத்தின் வரலாற்றில் பல புரட்சிகரமான கண்டுபிடிப்புகள் ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி குறிப்பிட்ட பிணைப்பு, பிசிஆர் தொழில்நுட்பம் மற்றும் வரிசைப்படுத்துதல் தொழில்நுட்பத்தின் கொள்கையின் அடிப்படையில் இம்யூனோலேபிளிங் தொழில்நுட்பம்.இன்று நாம் PCR தொழில்நுட்பத்தைப் பற்றி பேசுவோம்.PCR தொழில்நுட்பத்தின் பரிணாம வளர்ச்சியின் படி, மக்கள் வழக்கமாக PCR தொழில்நுட்பத்தை மூன்று தலைமுறைகளாகப் பிரிக்கிறார்கள்: சாதாரண PCR தொழில்நுட்பம், நிகழ்நேர ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR தொழில்நுட்பம் மற்றும் டிஜிட்டல் PCR தொழில்நுட்பம்.
Common PCR நுட்பம்
கேரி முல்லிஸ் (1944.12.28-2019.8.7)
கேரி முல்லிஸ் 1983 இல் பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை (பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை, பிசிஆர்) கண்டுபிடித்தார். அவர் தனது காதலியை ஓட்டிச் செல்லும் போது, திடீரென உத்வேகம் மற்றும் PCR கொள்கையை (ஓட்டுவதன் நன்மைகள் குறித்து) நினைத்ததாக கூறப்படுகிறது.கேரி முல்லிஸுக்கு வேதியியலுக்கான நோபல் பரிசு 1993 இல் வழங்கப்பட்டது. தி நியூயார்க் டைம்ஸ் கருத்துரைத்தது: "மிகவும் அசல் மற்றும் குறிப்பிடத்தக்க, கிட்டத்தட்ட உயிரியலை PCR-க்கு முந்தைய மற்றும் பிந்தைய காலங்களாக பிரிக்கிறது.
PCR இன் கொள்கை: DNA பாலிமரேஸின் வினையூக்கத்தின் கீழ், தாய் இழை டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டாகவும், குறிப்பிட்ட ப்ரைமரை நீட்டிப்பின் தொடக்க புள்ளியாகவும் பயன்படுத்தப்படுகிறது, மேலும் டிஎன்ஏ வார்ப்புருவுடன் இணையான மகள் ஸ்ட்ராண்ட் டிஎன்ஏ டினாடரேஷன், அனீலிங், நீட்டிப்பு மற்றும் பிற படிகள் மூலம் விட்ரோவில் நகலெடுக்கப்படுகிறது.இது விட்ரோவில் உள்ள டிஎன்ஏ தொகுப்பு பெருக்க தொழில்நுட்பமாகும், இது விட்ரோவில் எந்த இலக்கு டிஎன்ஏவையும் விரைவாகவும் குறிப்பாகவும் பெருக்க முடியும்.
சாதாரண PCR இன் நன்மைகள்
1.கிளாசிக் முறை, முழுமையான சர்வதேச மற்றும் உள்நாட்டு தரநிலைகள்
2.கருவி எதிர்வினைகளின் குறைந்த விலை
3.பிற மூலக்கூறு உயிரியல் சோதனைகளுக்கு PCR தயாரிப்புகளை மீட்டெடுக்க முடியும்
பரிந்துரைக்கப்பட்ட Foregene PCR இயந்திரம்: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
தொடர்புடைய தயாரிப்புகள்: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
சாதாரண PCR இன் தீமைகள்
1.மாசுபடுத்துவது எளிது
2.சிக்கலான செயல்பாடு
3.தரமான பகுப்பாய்வு மட்டுமே
4.மிதமான உணர்திறன்
5.குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கம் உள்ளது, மேலும் குறிப்பிட்ட அல்லாத இசைக்குழு இலக்கு இசைக்குழுவின் அதே அளவில் இருக்கும் போது, அதை வேறுபடுத்திப் பார்க்க முடியாது.
Cஅபில்லரி எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் அடிப்படையிலான பிசிஆர்
சாதாரண PCR இன் குறைபாடுகளுக்கு பதிலளிக்கும் விதமாக, சில உற்பத்தியாளர்கள் தந்துகி எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் கொள்கையின் அடிப்படையில் கருவிகளை அறிமுகப்படுத்தியுள்ளனர்.பிசிஆர் பெருக்கத்திற்குப் பிறகு எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் படி தந்துகியில் முடிந்தது.உணர்திறன் அதிகமாக உள்ளது, மேலும் பல தளங்களின் வேறுபாட்டை வேறுபடுத்தி, பெருக்கத்தை MAERKER மூலம் கணக்கிட முடியும்.தயாரிப்பு உள்ளடக்கம்.குறைபாடு என்னவென்றால், PCR தயாரிப்பு இன்னும் திறக்கப்பட வேண்டும் மற்றும் கருவியில் வைக்கப்பட வேண்டும், மேலும் மாசுபாட்டின் பெரும் ஆபத்து இன்னும் உள்ளது.
Cஅப்பிலரிEலெக்ட்ரோபோரேசிஸ்
2. நிகழ்நேர ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR (குவாண்டிடேட்டிவ் ரியல்-டைம் பிசிஆர், qPCR) தொழில்நுட்பம்Fluorescent quantitative PCR, Real-Time PCR என்றும் அழைக்கப்படுகிறது, இது 1995 இல் PE (பெர்கின் எல்மர்) ஆல் உருவாக்கப்பட்ட ஒரு புதிய நியூக்ளிக் அமில அளவு தொழில்நுட்பமாகும். ஃப்ளோரசன்ட் அளவு PCR இன் வளர்ச்சி வரலாறு ABI, Roche, மற்றும் Bio-Rache போன்ற ராட்சதர்களின் ஆன்மாவைத் தூண்டும் போராட்டங்களின் வரலாறாகும்.நீங்கள் ஆர்வமாக இருந்தால், நீங்கள் அதைப் பார்க்கலாம்.இந்த நுட்பம் தற்போது மிகவும் முதிர்ந்த மற்றும் பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படும் அரை-அளவு PCR நுட்பமாகும்.
பரிந்துரைக்கப்படும் qPCR இயந்திரம்:https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
ஃப்ளோரசன்ட் சாய முறை (SYBR Green I):SYBR Green I என்பது க்வாண்டிடேட்டிவ் பிசிஆருக்கு பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் டிஎன்ஏ-பிணைப்பு சாயமாகும், இது குறிப்பாக இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவுடன் பிணைக்கிறது.இலவச நிலையில், SYBR கிரீன் பலவீனமான ஒளிரும் தன்மையை வெளியிடுகிறது, ஆனால் ஒருமுறை இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவுடன் பிணைக்கப்பட்டால், அதன் ஒளிரும் தன்மை 1000 மடங்கு அதிகரிக்கிறது.எனவே, ஒரு எதிர்வினை மூலம் வெளிப்படும் மொத்த ஒளிரும் சமிக்ஞை, இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவின் அளவிற்கு விகிதாசாரமாக இருக்கும் மற்றும் பெருக்கப்பட்ட உற்பத்தியின் அதிகரிப்புடன் அதிகரிக்கும்.சாயம் குறிப்பாக இரட்டை இழை DNA உடன் பிணைப்பதால், தவறான நேர்மறை முடிவுகள் உருவாக்கப்படலாம்.
தொடர்புடைய தயாரிப்புகள்: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வு முறை (தக்மான் தொழில்நுட்பம்): போதுPCR பெருக்கம், ஒரு குறிப்பிட்ட ஃப்ளோரசன்ட் ஆய்வு ஒரு ஜோடி ப்ரைமர்களுடன் அதே நேரத்தில் சேர்க்கப்படுகிறது.ஆய்வு என்பது ஒரு நேரியல் ஒலிகோநியூக்ளியோடைடு ஆகும், இதில் ஃப்ளோரசன்ட் ரிப்போர்ட்டர் குழு மற்றும் ஃப்ளோரசன்ட் க்வென்சர் குழு ஆகியவை முறையே இரண்டு முனைகளிலும் பெயரிடப்பட்டுள்ளன.ஆய்வு அப்படியே இருக்கும் போது, நிருபர் குழுவால் வெளியிடப்படும் ஒளிரும் சமிக்ஞையானது க்வென்சர் குழுவால் உறிஞ்சப்படுகிறது, மேலும் ஃப்ளோரசன்ட் சிக்னல் இல்லை என்பதைக் கண்டறிதல்;PCR பெருக்கத்தின் போது (நீட்டிப்பு நிலையில்), Taq நொதியின் 5'-3' டைசர் செயல்பாடு ஆய்வை செரித்து சிதைக்கும், இதனால் நிருபர் ஃப்ளோரசன்ட் குழுவும் க்வென்சர் ஃப்ளோரசன்ட் குழுவும் பிரிக்கப்படுகின்றன, இதனால் ஃப்ளோரசன்சன் கண்காணிப்பு அமைப்பைப் பெற முடியும், அதாவது ஒவ்வொரு முறையும் ஒளிரும் சிக்னல் உருவாகிறது. ஃப்ளோரசன்ட் சிக்னல்களின் குவிப்பு மற்றும் PCR தயாரிப்புகளின் உருவாக்கம் ஆகியவற்றின் ஒத்திசைவு.தக்மான் ஆய்வு முறை என்பது மருத்துவ கண்டறிதலில் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் கண்டறிதல் முறையாகும்.
தொடர்புடைய தயாரிப்புகள்: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
qPCR இன் நன்மைகள்
1.முறை முதிர்ச்சியடைந்தது மற்றும் துணை உபகரணம் மற்றும் உலைகள் முழுமையாக உள்ளன
2.எதிர்வினைகளின் நடுத்தர விலை
3.பயன்படுத்த எளிதானது
4.உயர் கண்டறிதல் உணர்திறன் மற்றும் தனித்தன்மை
qPCR இன் தீமைகள்
இலக்கு மரபணுவின் பிறழ்வு, தவறவிட்ட கண்டறிதலுக்கு வழிவகுக்கிறது.
குறைந்த செறிவு டெம்ப்ளேட்டின் கண்டறிதல் முடிவைத் தீர்மானிக்க முடியாது.
அளவு கண்டறிதலுக்கு நிலையான வளைவைப் பயன்படுத்தும் போது ஒரு பெரிய பிழை உள்ளது.
3. டிஜிட்டல் PCR (டிஜிட்டல் PCR, dPCR) தொழில்நுட்பம்
டிஜிட்டல் பிசிஆர் என்பது நியூக்ளிக் அமில மூலக்கூறுகளின் முழுமையான அளவீட்டுக்கான ஒரு நுட்பமாகும்.qPCR உடன் ஒப்பிடும்போது, டிஜிட்டல் PCR ஆனது டிஎன்ஏ/ஆர்என்ஏ மூலக்கூறுகளின் எண்ணிக்கையை நேரடியாகப் படிக்க முடியும், இது தொடக்க மாதிரியில் உள்ள நியூக்ளிக் அமில மூலக்கூறுகளின் முழுமையான அளவீடு ஆகும்.1999 இல், பெர்ட் வோகெல்ஸ்டீன் மற்றும் கென்னத் டபிள்யூ. கின்-ஸ்லர் ஆகியோர் dPCR என்ற கருத்தை முறையாக முன்மொழிந்தனர்.
2006 ஆம் ஆண்டில், வணிக சிப் அடிப்படையிலான dPCR கருவியை முதன்முதலில் Fluidigm தயாரித்தது.2009 இல், Life Technologies ஆனது OpenArray மற்றும் QuantStudio 12K Flex dPCR அமைப்புகளை அறிமுகப்படுத்தியது.2013 ஆம் ஆண்டில், லைஃப் டெக்னாலஜிஸ் QuantStudio 3DdPCR அமைப்பை அறிமுகப்படுத்தியது, இது 20,000 தனிப்பட்ட செல்களுக்கு மாதிரிகளை சமமாக விநியோகிக்க அதிக அடர்த்தி கொண்ட நானோ அளவிலான மைக்ரோஃப்ளூய்டிக் சிப் தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்துகிறது.எதிர்வினை நன்றாக.
2011 ஆம் ஆண்டில், Bio-Rad துளி அடிப்படையிலான QX100 dPCR கருவியை அறிமுகப்படுத்தியது, இது 20,000 துளி-நீரில்-எண்ணெய்க்கு மாதிரியை சமமாக விநியோகிக்க, நீர்-எண்ணெய் தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்துகிறது, மேலும் நீர்த்துளிகளை பகுப்பாய்வு செய்ய ஒரு துளி பகுப்பாய்வியைப் பயன்படுத்துகிறது.2012 ஆம் ஆண்டில், ரெயின்டான்ஸ் ரெயின் டிராப் டிபிசிஆர் கருவியை அறிமுகப்படுத்தியது, இது உயர் அழுத்த வாயுவால் இயக்கப்படுகிறது, ஒவ்வொரு நிலையான எதிர்வினை அமைப்பையும் 1 மில்லியன் முதல் 10 மில்லியன் பைகோலிட்டர் அளவிலான மைக்ரோ-துளிகள் கொண்ட எதிர்வினை குழம்புகளாகப் பிரிக்கிறது.
இதுவரை, டிஜிட்டல் பிசிஆர் இரண்டு முக்கிய பிரிவுகளை உருவாக்கியுள்ளது, சிப் வகை மற்றும் துளி வகை.எந்த வகையான டிஜிட்டல் PCR ஆக இருந்தாலும், அதன் முக்கிய கொள்கைகள் நீர்த்துப்போதல், இறுதிப்புள்ளி PCR மற்றும் பாய்சன் விநியோகத்தை கட்டுப்படுத்துகின்றன.நியூக்ளிக் அமில வார்ப்புருக்களைக் கொண்ட நிலையான பிசிஆர் எதிர்வினை அமைப்பு பல்லாயிரக்கணக்கான பிசிஆர் எதிர்வினைகளாகப் பிரிக்கப்பட்டுள்ளது, அவை சிப்ஸ் அல்லது மைக்ரோ துளிகளுக்கு விநியோகிக்கப்படுகின்றன, இதனால் ஒவ்வொரு எதிர்வினையும் முடிந்தவரை ஒரு டெம்ப்ளேட் மூலக்கூறைக் கொண்டிருக்கும், மேலும் ஒற்றை-மூலக்கூறு வார்ப்புரு PCR எதிர்வினை செய்யப்படுகிறது.ஃப்ளோரசன்ஸைப் படிப்பதன் மூலம் சமிக்ஞையின் இருப்பு அல்லது இல்லாமை கணக்கிடப்படுகிறது, மேலும் புள்ளியியல் பாய்சன் விநியோகத்தின் அளவுத்திருத்தத்திற்குப் பிறகு முழுமையான அளவீடு செய்யப்படுகிறது.
நான் பயன்படுத்திய பல டிஜிட்டல் PCR இயங்குதளங்களின் பண்புகள் பின்வருமாறு:
1. பயோ-ரேட் QX200 துளி டிஜிட்டல் PCR பயோ-ரேட்QX200 என்பது மிகவும் உன்னதமான டிஜிட்டல் PCR இயங்குதளம், அடிப்படை கண்டறிதல் செயல்முறை: 20,000 மாதிரிகள் நீர்த்துளி ஜெனரேட்டரால் உருவாக்கப்படுகின்றன, ஒரு சாதாரண PCR இயந்திரத்தில் நீர்-எண்ணெய் மைக்ரோ-துளிகள் பெருக்கப்படுகின்றன, இறுதியாக ஒவ்வொரு மைக்ரோ-துளியின் ஒளிரும் சமிக்ஞையும் மைக்ரோ-துளி ரீடரால் படிக்கப்படுகிறது.செயல்பாடு மிகவும் சிக்கலானது, மேலும் மாசுபாட்டின் ஆபத்து நடுத்தரமானது.
Xinyi TD1 மைக்ரோ-துளி டிஜிட்டல் PCRXinyi TD1 என்பது ஒரு உள்நாட்டு டிஜிட்டல் PCR இயங்குதளம், அடிப்படை கண்டறிதல் செயல்முறை: ஒரு துளி ஜெனரேட்டர் மூலம் 30,000-50,000 நீர்-எண்ணெய் துளிகளை உருவாக்கி, ஒரு பொதுவான PCR கருவியில் பெருக்கி, இறுதியாக துளி ரீடர் ஒவ்வொரு துளியின் ஒளிரும் சமிக்ஞையைப் படிக்கிறது.இந்த மேடையில் நீர்த்துளி உருவாக்கம் மற்றும் வாசிப்பு இரண்டும் ஒரு பிரத்யேக சிப்பில் மாசுபடுவதற்கான குறைந்த அபாயத்துடன் செய்யப்படுகிறது.
ஸ்டில்லா நைக்கா மைக்ரோ-துளி சிப் டிஜிட்டல் பிசிஆர்STILLA Naica ஒப்பீட்டளவில் புதிய டிஜிட்டல் PCR தளமாகும்.அடிப்படை கண்டறிதல் செயல்முறை: சிப்பில் எதிர்வினை தீர்வைச் சேர்த்து, சிப்பை மைக்ரோ-துளி உருவாக்கம் மற்றும் பெருக்க அமைப்பில் வைத்து, 30,000 மைக்ரோ-துளிகளை உருவாக்கவும்.சிப்பில் பரவி, சிப்பில் PCR பெருக்கம் முடிந்தது.பின்னர் பெருக்கப்பட்ட சிப் மைக்ரோ-துளி வாசிப்பு பகுப்பாய்வு அமைப்புக்கு மாற்றப்படுகிறது, மேலும் ஒளிரும் சமிக்ஞை படங்களை எடுப்பதன் மூலம் படிக்கப்படுகிறது.முழு செயல்முறையும் ஒரு மூடிய சிப்பில் நடைபெறுவதால், மாசுபடுவதற்கான ஆபத்து குறைவாக உள்ளது.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D சிப் டிஜிட்டல் PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D என்பது மற்றொரு உன்னதமான சிப் அடிப்படையிலான டிஜிட்டல் PCR தளமாகும்.அதன் அடிப்படை கண்டறிதல் செயல்முறை: வினைத் தீர்வை ஸ்ப்ரேடரில் சேர்த்து, 20,000 மைக்ரோவெல்கள் மூலம் சிப்பில் எதிர்வினைக் கரைசலை சமமாக பரப்பி மூலம் பரப்பவும்., பிசிஆர் மெஷினில் சிப்பைப் பெருக்கி, இறுதியாக ரீடரில் சிப்பை வைத்து, ஃப்ளோரசன்ட் சிக்னலைப் படிக்க புகைப்படம் எடுக்கவும்.அறுவை சிகிச்சை ஒப்பீட்டளவில் சிக்கலானது, மேலும் முழு செயல்முறையும் ஒரு மூடிய சிப்பில் மேற்கொள்ளப்படுகிறது, மேலும் மாசுபாட்டின் ஆபத்து குறைவாக உள்ளது.
5. JN MEDSYS கிளாரிட்டி சிப் டிஜிட்டல் பிசிஆர்
JN MEDSYS Clarity என்பது ஒப்பீட்டளவில் புதிய சிப் வகை டிஜிட்டல் PCR தளமாகும்.அதன் அடிப்படை கண்டறிதல் செயல்முறை: விண்ணப்பதாரரில் எதிர்வினைத் தீர்வைச் சேர்த்து, பிசிஆர் குழாயில் பொருத்தப்பட்ட 10,000 பிசிஆர் குழாய்களில் வினைத் தீர்வை அப்ளிகேட்டர் மூலம் சமமாகப் பரப்பவும்.மைக்ரோபோரஸ் சிப்பில், எதிர்வினை கரைசல் தந்துகி நடவடிக்கை மூலம் சிப்பிற்குள் நுழைகிறது, மேலும் சிப்புடன் கூடிய பிசிஆர் குழாய் பெருக்குவதற்காக பிசிஆர் இயந்திரத்தில் வைக்கப்பட்டு, இறுதியாக சில்லு புகைப்படம் எடுத்து ஒளிரும் சிக்னலைப் படிக்க ரீடருக்குள் வைக்கப்படுகிறது.அறுவை சிகிச்சை மிகவும் சிக்கலானது.மாசுபடுவதற்கான ஆபத்து குறைவு.
ஒவ்வொரு டிஜிட்டல் PCR தளத்தின் அளவுருக்கள் பின்வருமாறு சுருக்கப்பட்டுள்ளன:
டிஜிட்டல் PCR தளத்தின் மதிப்பீட்டு குறிகாட்டிகள்: பிளவு அலகுகளின் எண்ணிக்கை, ஃப்ளோரசன்ட் சேனல்களின் எண்ணிக்கை, செயல்பாட்டின் சிக்கலான தன்மை மற்றும் மாசுபாட்டின் ஆபத்து.ஆனால் மிக முக்கியமான விஷயம் கண்டறிதல் துல்லியம்.டிஜிட்டல் பிசிஆர் இயங்குதளங்களை மதிப்பிடுவதற்கான ஒரு வழி, பல டிஜிட்டல் பிசிஆர் இயங்குதளங்களைப் பயன்படுத்தி ஒன்றையொன்று சரிபார்க்கவும், மற்றொரு வழி துல்லியமான மதிப்புகளுடன் நிலையான பொருட்களைப் பயன்படுத்துவதாகும்.
dPCR இன் நன்மைகள்
1.முழுமையான அளவை அடைதல்
2.அதிக உணர்திறன் மற்றும் தனித்தன்மை
3.குறைந்த நகல் மாதிரிகளைக் கண்டறிய முடியும்
dPCR இன் தீமைகள்1. விலையுயர்ந்த உபகரணங்கள் மற்றும் உலைகள் 2. சிக்கலான செயல்பாடு மற்றும் நீண்ட கண்டறிதல் நேரம் 3. குறுகிய கண்டறிதல் வரம்பு
தற்போது, PCR தொழில்நுட்பத்தின் மூன்று தலைமுறைகளுக்கு அவற்றின் சொந்த நன்மைகள் மற்றும் தீமைகள் உள்ளன, மேலும் ஒவ்வொன்றும் அதன் சொந்த பயன்பாட்டு புலங்களைக் கொண்டுள்ளன, மேலும் இது ஒரு தலைமுறை மற்றொன்றை மாற்றும் உறவு அல்ல.தொழில்நுட்பத்தின் தொடர்ச்சியான முன்னேற்றம் PCR தொழில்நுட்பத்தில் புதிய உயிர்ச்சக்தியைப் புகுத்தியுள்ளது, இது ஒரு பயன்பாட்டின் திசையை ஒன்றன் பின் ஒன்றாகத் திறக்க உதவுகிறது, மேலும் நியூக்ளிக் அமிலத்தைக் கண்டறிவதை மிகவும் வசதியாகவும் துல்லியமாகவும் ஆக்குகிறது.
ஆதாரம்: டாக்டர் யுவான் உங்களை சோதனைக்கு அழைத்துச் செல்கிறார்
பரிந்துரைக்கப்பட்ட தயாரிப்புகள்:
இடுகை நேரம்: நவம்பர்-18-2022
