வழி நடத்து

நீண்ட குறியீட்டு அல்லாத ஆர்என்ஏ, எல்என்சிஆர்என்ஏ என்பது 200 நியூக்ளியோடைடுகளுக்கு மேல் நீளம் கொண்ட, பொதுவாக 200-100000 என்டிக்கு இடைப்பட்ட குறியீட்டு அல்லாத ஆர்என்ஏ ஆகும்.எல்என்சிஆர்என்ஏ எபிஜெனெடிக், டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் பிந்தைய டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனல் நிலைகளில் மரபணு வெளிப்பாட்டைக் கட்டுப்படுத்துகிறது, மேலும் எக்ஸ் குரோமோசோம் சைலன்ஸ், ஜீனோம் இம்ப்ரிண்டிங் மற்றும் க்ரோமாடின் மாற்றம், டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ஆக்டிவேஷன், டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் குறுக்கீடு, அணுக்கரு போக்குவரத்து, செல் சுழற்சி கட்டுப்பாடு, செல் வேறுபாட்டின் நெருக்கமான விளைவுகள் போன்றவை. ence, வளர்ச்சி மற்றும் மனித நோய்களின் தடுப்பு, மற்றும் தற்போது உயிரி மருத்துவத் துறையில் ஹாட் ஸ்பாட்களில் ஒன்றாகும்.

01  LncRNA இன் வகைகள் மற்றும் பண்புகள்

மேலே உள்ள படத்தில் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, அதன் உருவாக்கத்தின் வெவ்வேறு ஆதாரங்களின்படி lncRNA பல வகைகளாகப் பிரிக்கப்பட்டுள்ளது.பின்வரும் பண்புகள் உள்ளன:

1. எல்என்சிஆர்என்ஏக்கள் பொதுவாக நீளமானவை, டைனமிக் வெளிப்பாடு மற்றும் வேறுபாட்டின் போது வெவ்வேறு பிளவு முறைகள்
2. குறியீட்டு மரபணுக்களுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​lncRNA பொதுவாக குறைந்த வெளிப்பாடு அளவைக் கொண்டுள்ளது
3. பெரும்பாலான எல்என்சிஆர்என்ஏக்கள் திசு வேறுபாடு மற்றும் வளர்ச்சியின் செயல்பாட்டில் வெளிப்படையான தற்காலிக மற்றும் இடஞ்சார்ந்த வெளிப்பாடு தனித்தன்மையைக் கொண்டுள்ளன
4. கட்டிகள் மற்றும் பிற நோய்களில் சிறப்பியல்பு வெளிப்பாடுகள் உள்ளன
5. எல்என்சிஆர்என்ஏவின் துணைசெல்லுலார் இடங்கள் வேறுபட்டவை
6. வரிசை பாதுகாப்பில் குறைவாக உள்ளது, ஆனால் செயல்பாடு ஒரு குறிப்பிட்ட அளவு பாதுகாப்பு, முதலியன உள்ளது.

02 LncRNA ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் பற்றி அடிக்கடி கேட்கப்படும் கேள்விகள்

உயிரணுக்களில் உள்ள LncRNA இன் குறைந்த உள்ளடக்கம், நீண்ட நீளம் மற்றும் உயர்-நிலை அமைப்பு ஆகியவற்றின் காரணமாக, அத்தகைய RNA பெரும்பாலும் தண்டு வளையங்கள் அல்லது ஹேர்பின்கள் போன்ற சிக்கலான கட்டமைப்புகளைக் கொண்டுள்ளது, மேலும் RT-qPCR தோல்வியுற்ற தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் அல்லது குறைந்த செயல்திறன் சிக்கல்களுக்கு ஆளாகிறது.

03 LncRNA தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் தீர்வு

மைய விதியில், ஆர்என்ஏ வைரஸ்கள் அவற்றின் சொந்த தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸைப் பயன்படுத்தி டிஎன்ஏவை ஒரு டெம்ப்ளேட்டாகப் பயன்படுத்தி டிஎன்ஏவை ஒருங்கிணைக்கும் செயல்முறை தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் என்று அழைக்கப்படுகிறது.சிடிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டை விட்ரோவில் ஒருங்கிணைக்க ஆர்என்ஏ வைரஸ் ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸைப் பயன்படுத்தும் செயல்முறை தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் என்று அழைக்கப்படுகிறது.தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் அமைப்பில் உள்ள முக்கிய கூறுகள்: ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட், ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ், ப்ரைமர்கள் மற்றும் பிற கூறுகள்.

1.ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட்

ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனில் ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட்டின் தாக்கம் அதன் அமைப்பு, தூய்மை மற்றும் ஒருமைப்பாடு ஆகியவற்றில் பிரதிபலிக்கிறது.பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏவின் தூய்மையும் ஒருமைப்பாடும் அதிகமாக இருந்தால், ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனின் செயல்திறன் அதிகமாகும் மற்றும் அடுத்தடுத்த அளவு முடிவுகள் மிகவும் துல்லியமாக இருக்கும்.பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கும் உதிரிபாகங்களால் சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ பெரும்பாலும் ஆல்கஹால் மற்றும் குவானிடின் உப்புகளின் எச்சங்களைக் கொண்டுள்ளது, அவை பெரும்பாலான தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸில் வலுவான தடுப்பு விளைவைக் கொண்டுள்ளன.

2.தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ்

முழு தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் அமைப்பிலும் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸ் ஒரு முக்கிய செல்வாக்கைக் கொண்டுள்ளது.பெரும்பாலான ஆய்வகங்களில் பயன்படுத்தப்படும் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸிற்கான பொருத்தமான வெப்பநிலை பொதுவாக 42 டிகிரி செல்சியஸ் ஆகும்.உண்மையில், உயர் நிலை RNA கட்டமைப்பின் திறப்புக்கு அதிக வெப்பநிலை தேவைப்படுகிறது, மேலும் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸின் தேவைகள் அதிகமாக இருக்கும்.

3.ப்ரைமர்

ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் ப்ரைமர்களில் மரபணு-குறிப்பிட்ட ப்ரைமர்கள், ரேண்டம் ப்ரைமர்கள் மற்றும் ஒலிகோ டிடி ப்ரைமர்கள் ஆகியவை அடங்கும்.பெரும்பாலான எல்என்சிஆர்என்ஏக்கள் பாலிஏ டெயில்களைக் கொண்டிருக்கவில்லை, மேலும் ஒலிகோ டிடியுடன் சீரற்ற ப்ரைமர்களை சரியாகப் பொருத்துவது முக்கியம்.

4.மற்ற கூறுகள்

ஆர்என்ஏவை சிதைப்பது மிகவும் எளிதானது என்ற உண்மையைக் கருத்தில் கொண்டு, தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் அமைப்பில் கூறுகளின் அறிமுகம் குறைக்கப்படலாம், இது RNase இன் நுழைவைத் தடுக்கும் மற்றும் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனின் சீரான முன்னேற்றத்தை உறுதிசெய்யும்.

Fஓரிஜின்ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட்டிலிருந்து பெறுகிறது, qPCRக்கு தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன்

உங்கள் எல்என்சிஆர்என்ஏ கண்டறிதலை முழுமையாகப் பாதுகாக்கவும்

விலங்குகளின் மொத்த RNA Iதீர்வுகிட் (gDNA அகற்றும் நெடுவரிசையுடன்)

செல் மொத்த RNA Iதீர்வுகிட் (gDNA அகற்றும் நெடுவரிசையுடன்)

Lnc-RT HeroTM I(gDNase உடன்)(lncRNA இலிருந்து முதல்-ஸ்ட்ராண்ட் cDNA தொகுப்புக்கான சூப்பர் பிரீமிக்ஸ்)

ரியல் டைம் PCR EasyTM-SYBR Green I

Aநன்மைகள் ofஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல்:

கிட் மூன்றாம் தலைமுறை RNA பிரித்தெடுத்தல் தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்துகிறது, DNase ஐப் பயன்படுத்த வேண்டிய அவசியமில்லை.

96, 24, 12, மற்றும் 6-கிணறு தகடு வளர்ப்பு கலங்களிலிருந்து 11 நிமிடங்கள், gDNA-இல்லாத, உயர்-தூய்மை, உயர்தர மொத்த செல் RNA இன் உயர்-திறன் பிரித்தெடுத்தல்.

lncRNA ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷனின் நன்மைகள்:

மரபணு DNA மாசுபாட்டை விரைவாக அகற்றுவதற்காக LncRNA க்காக பிரத்யேகமாக உருவாக்கப்பட்ட ஒரு தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் அமைப்பு.

ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் சிஸ்டம் அதிக வெப்ப நிலைத்தன்மையைக் கொண்டுள்ளது மற்றும் 50 டிகிரி செல்சியஸில் நல்ல ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் செயல்திறனைக் கொண்டுள்ளது.

உயர் GC உள்ளடக்கம் மற்றும் சிக்கலான இரண்டாம் நிலை அமைப்புடன் கூடிய வார்ப்புருக்கள் உயர் செயல்திறனுடன் மாற்றியமைக்கப்படும்.

நன்மைகள்of qPCR:

ஹாட் ஸ்டார்ட் ஃபோர்ஜீன் டாக் பாலிமரேஸ் அதிக பெருக்க திறன், அதிக பெருக்க உணர்திறன் மற்றும் அதிக பெருக்க விவரக்குறிப்பு ஆகியவற்றைக் கொண்டுள்ளது.

மேம்படுத்தப்பட்ட ரியல் பிசிஆர் ஈஸி மிக்ஸ் SYBR க்ரீன் ஐ அதிக கண்டறிதல் உணர்திறன் கொண்டதாக ஆக்குகிறது, மேலும் அதன் ஒளிரும் தீவிரம் ஒரே மாதிரியான தயாரிப்புகளை விட 3-5 மடங்கு அதிகமாகும், இது பல்வேறு வகையான ஃப்ளோரசன்ஸ் அளவு சோதனைகளின் தேவைகளை பூர்த்தி செய்யும்.