• முகநூல்
  • இணைக்கப்பட்ட
  • வலைஒளி

1. ஆர்என்ஏ கரைசலின் உறிஞ்சுதலைக் கண்டறியவும்

280, 320, 230 மற்றும் 260 nm இல் உறிஞ்சுதல் முறையே நியூக்ளிக் அமிலம், பின்னணி (தீர்வு கொந்தளிப்பு), உப்பு செறிவு மற்றும் புரதம் போன்ற கரிமப் பொருட்களின் மதிப்புகளைக் குறிக்கிறது.பொதுவாக OD260/OD280 (விகிதம், R) ஐ மட்டும் பார்க்கவும்.1.8~2.0 ஆக இருக்கும் போது, ​​ஆர்என்ஏவில் உள்ள புரதம் அல்லது பிற கரிமப் பொருட்களின் மாசுபாட்டை பொறுத்துக்கொள்ள முடியும் என்று நாங்கள் நினைக்கிறோம், ஆனால் டிரிஸ் உறிஞ்சுதலைக் கண்டறிய இடையகமாகப் பயன்படுத்தப்படும்போது, ​​R மதிப்பு 2ஐ விட அதிகமாக இருக்கலாம் (பொதுவாக அது <2.2 ஆக இருக்க வேண்டும்) என்பதைக் கவனத்தில் கொள்ள வேண்டும்.R<1.8 போது, ​​கரைசலில் உள்ள புரதம் அல்லது பிற கரிமப் பொருட்களின் மாசுபாடு மிகவும் வெளிப்படையானது, மேலும் RNA இன் தலைவிதியை தேவைகளுக்கு ஏற்ப தீர்மானிக்க முடியும்.R>2.2 என்றால், ஆர்என்ஏ ஒற்றை நியூக்ளிக் அமிலமாக ஹைட்ரோலைஸ் செய்யப்பட்டுள்ளது என்று அர்த்தம்.
 
2.ஆர்என்ஏவின் எலக்ட்ரோஃபோரெடிக் முறை
பொதுவாக, ஆர்என்ஏ எலக்ட்ரோபோரேசிஸுக்கு டினாட்டரிங் ஜெல் பயன்படுத்தப்படுகிறது, ஆனால் இது ஆர்என்ஏவின் தரத்தைக் கண்டறிய மட்டுமே என்றால், டினாட்டரிங் ஜெல் தேவையில்லை, மேலும் சாதாரண அகரோஸ் ஜெல் பயன்படுத்தலாம்.எலக்ட்ரோபோரேசிஸின் நோக்கம் 28S மற்றும் 18S பட்டைகளின் ஒருமைப்பாடு மற்றும் அவற்றின் விகிதம் அல்லது எம்ஆர்என்ஏ ஸ்மியர் ஒருமைப்பாடு ஆகியவற்றைக் கண்டறிவதாகும்.பொதுவாக, 28S மற்றும் 18S பட்டைகள் பிரகாசமாகவும், தெளிவாகவும், கூர்மையாகவும் இருந்தால் (பேண்டுகளின் விளிம்புகள் தெளிவாக உள்ளன), மற்றும் 28S இன் பிரகாசம் 18S பேண்டை விட இரண்டு மடங்கு அதிகமாக இருந்தால், ஆர்என்ஏவின் தரம் நன்றாக இருக்கும் என்று கருதுகிறோம்.
மேலே உள்ளவை நாம் பொதுவாகப் பயன்படுத்தும் இரண்டு முறைகள், ஆனால் இந்த இரண்டு முறைகளிலும் ஆர்என்ஏ கரைசலில் எஞ்சிய RNase உள்ளதா என்பதை தெளிவாகக் கூற முடியாது.கரைசலில் மிகக் குறைந்த அளவு RNase இருந்தால், மேலே உள்ள முறையின் மூலம் அதைக் கண்டறிவது கடினம், ஆனால் அடுத்தடுத்த நொதி எதிர்வினைகள் 37 டிகிரிக்கு மேல் மற்றும் நீண்ட காலத்திற்கு மேற்கொள்ளப்படுகின்றன.இப்படியாக, ஆர்என்ஏ கரைசலில் மிகக் குறைந்த அளவு RNase இருந்தால், அடுத்தடுத்த சோதனைகளில் தங்கள் பங்கை ஆற்றுவதற்கு மிகவும் பொருத்தமான சூழலும் நேரமும் இருக்கும், நிச்சயமாக இந்த நேரத்தில் சோதனை குளிர்ச்சியாக இருக்கும்.RNA கரைசலில் எஞ்சிய RNase உள்ளதா என்பதை உறுதிப்படுத்தும் முறையை கீழே அறிமுகப்படுத்துகிறோம்.
 
3. வெப்ப பாதுகாப்பு சோதனை
மாதிரி செறிவின்படி, ஆர்என்ஏ கரைசலில் இருந்து இரண்டு 1000 என்ஜி ஆர்என்ஏவை வரைந்து, அதை 0.5 மிலி மையவிலக்குக் குழாயில் சேர்த்து, பிஹெச் 7.0 டிரிஸ் பஃபருடன் 10 உல் மொத்த வால்யூமுடன் சேர்த்து, பின்னர் குழாயின் தொப்பியை மூடவும்.அவற்றில் ஒன்றை 70 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் நிலையான நீர் குளியல் ஒன்றில் வைத்து 1 மணிநேரம் சூடாக வைக்கவும்.மற்ற பகுதி 1 மணிநேரத்திற்கு -20 ° C குளிர்சாதன பெட்டியில் சேமிக்கப்பட்டது.நேரம் முடிந்ததும், எலக்ட்ரோபோரேசிஸிற்கான இரண்டு மாதிரிகளை அகற்றவும்.எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் முடிந்ததும், இரண்டின் எலக்ட்ரோஃபோரெடிக் பட்டைகளை ஒப்பிடவும்.இரண்டின் பட்டைகள் சீரானதாகவோ அல்லது குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடு இல்லாமலோ இருந்தால் (நிச்சயமாக, அவற்றின் பட்டைகள் முறை 2 இல் உள்ள நிபந்தனைகளையும் சந்திக்கின்றன), இதன் பொருள் RNA கரைசலில் எஞ்சிய RNase மாசுபாடு இல்லை, மேலும் RNA இன் தரம் மிகவும் நன்றாக உள்ளது.மாறாக, 70°C இல் அடைகாக்கப்பட்ட மாதிரி வெளிப்படையான சிதைவைக் காட்டினால், RNA கரைசலில் RNase மாசு இருப்பதைக் குறிக்கிறது.
 
2 ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கான பரிசோதனை முறைகள் மற்றும் நுட்பங்கள்
ஆர்என்ஏவை பிரித்தெடுக்கும் போது நாம் அடிக்கடி சந்திக்கும் பிரச்சனைகள்: (1) ஆர்என்ஏ விளைச்சல் குறைவு;(2) ஆர்என்ஏ தீவிர உப்பு மாசுபாட்டைக் கொண்டுள்ளது;(3) ஆர்என்ஏ தீவிர கரிம கரைப்பான் மாசுபாட்டைக் கொண்டுள்ளது;(4) மாதிரி சிதைவு மற்றும் பிற சிக்கல்கள்
 
1. பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் மொத்த RNA பிரித்தெடுக்கும் வினைகள்
குவானிடைன் ஐசோதியோசயனேட் முறை மற்றும் ட்ரைசோல் முறை ஆகியவை விலங்கு திசுக்கள் மற்றும் விலங்கு உயிரணுக்களிலிருந்து மொத்த ஆர்என்ஏவை பிரித்தெடுப்பதற்கு பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் முறைகள் ஆகும்.முயல் தோல் மற்றும் விலங்குகளின் இணைப்பு திசுக்களில் இருந்து மொத்த RNA பிரித்தெடுத்தல் போன்ற பிரித்தெடுப்பதற்கு குறிப்பாக கடினமாக இருக்கும் சிறிய மாதிரிகள் மற்றும் திசுக்களுக்கு இது மிகவும் பொருத்தமானது;கூடுதலாக, ட்ரைசோல், ஒரு பொது-நோக்கு சிதைவு மறுபொருளாக, தாவர திசுக்கள், பாக்டீரியா, பூஞ்சை மற்றும் பிற திசுக்களைப் பிரித்தெடுக்கவும் பயன்படுத்தப்படலாம்.காமெலியா ஒலிஃபெரா, தேயிலை இலைகள், ராப்சீட் போன்ற பாலிசாக்கரைடுகள் மற்றும் பாலிபினால்கள் கொண்ட தாவர திசுக்களுக்கு, மொத்த ஆர்என்ஏவை பிரித்தெடுக்க CTAB முறையைப் பயன்படுத்தலாம்.

ஒரு வழக்கமான முறையாக, இரட்டை நெடுவரிசை முறை அதன் இயல்பான வெப்பநிலை செயல்பாட்டின் காரணமாக மிகவும் பிரபலமாக உள்ளது, RNase ஐ சேர்க்க வேண்டிய அவசியமில்லை, மற்றும் பாதுகாப்பு - பிரித்தெடுப்பதற்கு குளோரோஃபார்ம், பீனால்கள் மற்றும் பிற கரிம வினைகள் இல்லை.(பரிந்துரைக்கப்பட்ட தயாரிப்புகள் )

1
2

2. விலங்கு திசுக்களில் இருந்து மொத்த RNA பிரித்தெடுத்தல்
 
(1) புதிய திசுவைத் தேர்ந்தெடுக்க முயற்சிக்கவும், அது புதியதாக இல்லாவிட்டால் (முன்னுரிமை - 80 ℃ குளிர்சாதனப்பெட்டி அல்லது திரவ நைட்ரஜனில் உறைந்திருக்கும். திசுவை வெட்டும்போது, ​​அறை வெப்பநிலையில் நேரடியாக வெட்ட வேண்டாம், ஐஸ் பெட்டியில் வைக்கவும், மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் உருகுவதைத் தவிர்க்க முயற்சிக்கவும்.
(2) ஒரு சிறிய துண்டு திசுக்களை வெட்ட சுத்தமான கத்தரிக்கோல் மற்றும் சாமணம் பயன்படுத்தவும், மாதிரியை வெட்டும்போது திசுவின் மையப் பகுதியை வெட்ட முயற்சிக்கவும் அல்லது முதலில் நடுத்தரத்திலிருந்து பெரிய திசுக்களை வெட்டவும், பின்னர் புதிய கீறல் நிலையில் மாதிரியை வெட்டவும்.அகற்றப்பட்ட திசுக்களை முழுமையாக துண்டாக்க வேண்டும், துண்டாக்கப்பட்ட திசுக்களை RNase இல்லாமல் ஒரு EP குழாயில் போட்டு, லைசேட்டைச் சேர்த்து, துண்டாக்கப்பட்ட திசுக்களை முழுமையாக லைசேட்டிற்கு வெளிப்படுத்தி, ஒரே மாதிரியான தன்மைக்கு தயார்படுத்த வேண்டும்.

(3) சாதாரண திசுக்களுக்கு, ஒரே மாதிரியான தன்மைக்காக வெண்டைக்காய் அளவிலான திசுக்களை (30-60 மிகி) தேர்ந்தெடுக்கவும்.திசுக்களில் அதிக அளவு புரதம், கொழுப்பு அல்லது கல்லீரல் போன்ற அடர்த்தியான நார்ச்சத்து திசுக்கள் இருந்தால், வெட்டு திசுக்களின் அளவை சரியான முறையில் அதிகரிக்கவும் அல்லது குறைக்கவும் (விரும்பினால்) 10~20 மி.கி தேர்வு செய்யவும்.
(4) மீன் தசை, இறால் இறைச்சி, ஜெல்லிமீன் மற்றும் அதிக நீர் உள்ளடக்கம் கொண்ட பிற திசுக்கள் பிரித்தெடுக்கப்பட்டால், மாதிரி அளவை சரியான முறையில் அதிகரிக்க வேண்டும் (100-200 மி.கி. பரிந்துரைக்கப்படுகிறது).
(5) நிபந்தனைகள் அனுமதித்தால், விலங்கு திசுக்களை நேரடியாக ஒரு உயர்-பாதை திசு ஒத்திசைப்பான் மூலம் ஒரே மாதிரியான பிறகு பிரித்தெடுக்க முடியும், அத்தகைய உபகரணங்கள் இல்லை என்றால்.
(6) ஆர்என்ஏவின் சிதைவைக் குறைக்க, இறுதிப் பிரித்தெடுத்த பிறகு பெறப்பட்ட ஆர்என்ஏ ஐஸ் பெட்டியில் உடனடியாக வைக்கப்பட வேண்டும்.

3. விலங்கு செல் ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல்

(1) சஸ்பென்ஷன் செல்கள்: நேரடியாக மையவிலக்கு மற்றும் ஊடகத்தை நிராகரிக்கவும், 1-2 முறை மலட்டு PBS மூலம் கழுவவும், பின்னர் பொருத்தமான அளவு PBS உடன் இடைநிறுத்தவும், பின்னர் லிசிஸுக்கு லைசேட் சேர்க்கவும்.திரவத்தை முழுவதுமாக நிராகரித்த பிறகு, லைசேட்டை நேரடியாக வீழ்படிந்த செல்களில் சேர்க்க வேண்டாம்.இது வெளிப்புற அடுக்கில் உள்ள லைஸ் செய்யப்பட்ட செல்களுக்குப் பிறகு வெளியிடப்படும் ஹிஸ்டோன் தொகுப்பை துரிதப்படுத்தப்பட்ட கலங்களின் வெளிப்புறத்தில் ஒட்டிக்கொள்ளச் செய்யும், இதன் மூலம் பெல்லட் உள்ளே செல்கள் லைசேட்டுடன் தொடர்பு கொள்வதைக் கட்டுப்படுத்துகிறது., இதன் விளைவாக முழுமையற்ற செல் சிதைவு மற்றும் RNA விளைச்சல் குறைகிறது.

(2) அரை ஒட்டிய அல்லது இறுக்கமாக ஒட்டாத செல்கள்: ஊடகத்தை நிராகரித்த பிறகு, பிபிஎஸ் மூலம் 1-2 முறை கழுவி, பின்னர் நேரடியாக பிபிஎஸ்ஸை உறிஞ்சி, கலங்களை வெடிக்க பைப்பட் அல்லது துப்பாக்கியால் கல்ச்சர் டிஷை ஊதி, ஆர்என்ஏ இல்லாத கலங்களுக்கு மாற்றவும்.பிரித்தெடுக்க என்சைமின் EP குழாயில் லைசேட்டைச் சேர்க்கவும்.

(3) ஒட்டிய செல்கள்: முதலில் டிரிப்சினுடன் ஜீரணிக்கப்பட வேண்டும், பின்னர் RNase-இலவச EP குழாய்களில் சேகரிக்கப்பட்டு, சூப்பர்நேட்டன்ட்டை அகற்ற மையவிலக்கு செய்யப்பட்டு, அதிகப்படியான டிரிப்சினை அகற்ற PBS உடன் 1-2 முறை கழுவி, சரியான அளவு PBS உடன் மீண்டும் இணைக்கப்பட வேண்டும், பின்னர் பிரித்தெடுக்கும் படிக்குச் செல்லவும்.

4. தாவர RNA பிரித்தெடுத்தல்

தாவர திசுக்கள் ஃபீனாலிக் கலவைகள் நிறைந்தவை, அல்லது பாலிசாக்கரைடுகள் நிறைந்தவை, அல்லது சில அடையாளம் தெரியாத இரண்டாம் நிலை வளர்சிதை மாற்றங்களைக் கொண்டிருக்கின்றன அல்லது RNase இன் உயர் செயல்பாட்டைக் கொண்டுள்ளன.இந்த பொருட்கள் உயிரணு சிதைவுக்குப் பிறகு RNA உடன் இறுக்கமாக இணைந்து கரையாத வளாகங்கள் அல்லது கூழ் படிவுகளை உருவாக்குகின்றன, அவை அகற்றுவது கடினம்.எனவே, நாம் தாவர திசுக்களை பிரித்தெடுக்கும் போது, ​​தாவரங்களுக்கு ஒரு கிட் தேர்வு செய்ய வேண்டும்.கிட்டில் உள்ள லைசேட், பாலிஃபீனால்களின் எளிதான ஆக்சிஜனேற்றம் மற்றும் பாலிசாக்கரைடு கலவைகள் மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலங்களைப் பிரித்தல் போன்ற பிரச்சனைகளை திறம்பட தீர்க்கும்.

(பாலிசாக்கரைடு பாலிஃபீனால் ஆலை RNA பிரித்தெடுக்க, பரிந்துரைக்கப்பட்ட தயாரிப்புகள்:

(1) தாவரத்தின் தோல், கூழ், விதைகள், இலைகள் போன்றவற்றை ஒரு சாந்தில் முழுமையாக அரைக்க வேண்டும்.அரைக்கும் செயல்பாட்டின் போது, ​​மாதிரி உருகுவதைத் தவிர்க்க திரவ நைட்ரஜனை சரியான நேரத்தில் நிரப்ப வேண்டும்.ஆர்என்ஏ சிதைவைத் தவிர்க்க தரை மாதிரியை லைசேட்டுடன் விரைவாகச் சேர்த்து அசைக்க வேண்டும்.

(2) அரிசி மற்றும் கோதுமை இலைகள் போன்ற நார்ச்சத்து நிறைந்த மாதிரிகளுக்கு, பிரித்தெடுக்கும் அளவு சரியான முறையில் குறைக்கப்பட வேண்டும், இல்லையெனில் திசு அரைத்தல் மற்றும் சிதைவு முழுமையடையாது, இதன் விளைவாக பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ குறைந்த மகசூல் கிடைக்கும்.

(3) மாதுளை பழம், தர்பூசணி பழம், பீச் பழம் போன்ற அதிக நீர்ச்சத்து உள்ள தாவர திசுக்களுக்கு, மாதிரி அளவை சரியான முறையில் அதிகரிக்க வேண்டும் (100-200 மி.கி. விருப்பமானது).

(4) தாவரத்தின் இலைகள், வேர்த்தண்டுக்கிழங்குகள், கடினமான பழங்கள் மற்றும் பிற பொருட்கள் போன்ற தாவர திசுக்கள் பொதுவாக திரவ நைட்ரஜனைப் பயன்படுத்தி ஒரு சாந்தியிலுள்ள பொருட்களை நன்கு சாந்து, பின்னர் பிரித்தெடுக்கும் படிக்குச் செல்ல பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.வழக்கமான திசு ஒத்திசைவுகள் தாவர திசுக்களை ஒரே மாதிரியாக மாற்றுவதில் பயனுள்ளதாக இருக்காது, மேலும் அவை பொதுவாக பரிந்துரைக்கப்படுவதில்லை.

5. ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுப்பதற்கான முன்னெச்சரிக்கைகள்

(1) மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் உருகுவதைத் தவிர்க்க திசு மாதிரிகள் முடிந்தவரை புதியதாக இருக்க வேண்டும்.

(2) பிரித்தெடுக்கும் போது திசு முழுமையாக அரைக்கப்பட வேண்டும், மேலும் திசுக்களின் அளவு மிகக் குறைவாக இருக்கக்கூடாது, அதிகமாக இருக்கக்கூடாது.

(3) மாதிரியை முழுமையாக லைஸ் செய்ய லைசேட்டைச் சேர்த்த பிறகு, போதுமான அடைகாக்கும் நேரம் கொடுக்கப்பட வேண்டும்.

(4) பிரித்தெடுப்பதற்கு ட்ரைசோல் முறையைப் பயன்படுத்தும் போது, ​​அடுக்குப்படுத்தலுக்குப் பிறகு சூப்பர்நேட்டன்ட்டை உறிஞ்சும் கொள்கையானது "அதிகமாக உள்ளிழுப்பதை விட குறைவாக உள்ளிழுக்க விரும்புவது", மற்றும் நடுத்தர அடுக்குக்கு பிரித்தெடுக்கக்கூடாது, இல்லையெனில் அது தீவிர மரபணு டிஎன்ஏ மாசுபாட்டை ஏற்படுத்தும்.

(5) சலவை செய்யும் போது, ​​சலவை திரவம் முழுவதுமாக குழாய் சுவரை சுற்றி ஊடுருவி நன்கு கழுவுவதை உறுதி செய்ய வேண்டும்.

(6) நெடுவரிசைப் பிரித்தெடுக்கும் முறைக்கு, துவைத்த பிறகு நெடுவரிசையைப் பிரிப்பதுடன், உறிஞ்சும் நெடுவரிசையையும் ஒரு அதி-சுத்தமான பெஞ்சில் வைத்து, 5-10 நிமிடங்களுக்கு ஊதினால், கரிம கரைப்பான் வறட்சிக்கு முழுமையாக ஆவியாகிவிடும்.

(7) நெடுவரிசை முறையின் கடைசி எலுஷனில், DEPC தண்ணீரைச் சேர்த்த பிறகு, அதை 3-5 நிமிடங்கள் அடைகாக்க வேண்டும், அல்லது DEPC தண்ணீரை முன்கூட்டியே 60 டிகிரி செல்சியஸ் வரை சூடாக்க வேண்டும்.பாரம்பரிய ட்ரைசோல் பிளவு மற்றும் ஐசோப்ரோபனோல் மழைவீழ்ச்சி முறையில், இறுதி ஆர்என்ஏ DEPC நீரில் கரைக்கப்படுகிறது, எனவே கலைப்பதற்கு பொருத்தமான நேரம் கொடுக்கப்பட வேண்டும், மேலும் மையவிலக்குக் குழாயின் அடிப்பகுதியை ஒரு பைப்பெட் முனையுடன் தொடர்ந்து ஊத வேண்டும்.

3 டிhree குறைந்த RNA செறிவு/மோசமான தரத்திற்கான காரணங்கள் மற்றும் தீர்வுகள்
 
1. விளைச்சல் மிகக் குறைவு
பிரித்தெடுக்கப்பட்ட மாதிரி மிகவும் குறைவாக உள்ளது, மொத்த அளவு போதுமானதாக இல்லை, அல்லது பிரித்தெடுக்கப்பட்ட மாதிரி அதிகமாக உள்ளது மற்றும் சிதைவு முழுமையடையவில்லை;திசு அல்லது பொருத்தமான தரத்தின் செல்கள் பிரித்தெடுக்க பயன்படுத்தப்பட வேண்டும், மாதிரியின் முன் சிகிச்சை நன்றாக செய்யப்பட வேண்டும், மேலும் சிதைவு போதுமானதாக இருக்க வேண்டும்.
 
2. மரபணு எச்சங்கள்
ட்ரைசோல் முறையில் பிரித்தெடுக்கும் போது, ​​அடுக்குக்குப் பிறகு நடுத்தர அடுக்கில் சூப்பர்நேட்டன்ட் உறிஞ்சப்படும் போது, ​​தீவிர மரபணு மாசுபாடு ஏற்படும்;நடுத்தர அடுக்கில் உறிஞ்சப்படுவதைத் தவிர்க்க அடுக்கும் போது கூடுதல் கவனம் எடுக்கப்பட வேண்டும்.பிரித்தெடுக்க நெடுவரிசை முறை பயன்படுத்தப்பட்டால், பிரித்தெடுப்பதற்கு DNase I ஐக் கொண்ட கிட் தேர்ந்தெடுக்கப்படலாம்.மென்படலத்தில் உறிஞ்சப்பட்ட நியூக்ளிக் அமிலம் DNase I உடன் நேரடியாக செரிக்கப்படுகிறது, இது DNA எச்சங்களை வெகுவாகக் குறைக்கும்.
 
3. ஆர்என்ஏ சிதைவு
இது பிரித்தெடுக்கப்பட்ட மாதிரியின் சிதைவாக இருக்கலாம் அல்லது பிரித்தெடுக்கும் செயல்பாட்டின் போது ஏற்படும் சிதைவாக இருக்கலாம்;முடிந்தவரை, ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்க புதிய மாதிரிகள் பயன்படுத்தப்பட வேண்டும், மேலும் சேகரிக்கப்பட்ட மாதிரிகள் திரவ நைட்ரஜன் அல்லது -80 ° C குளிர்சாதன பெட்டியில் சரியான நேரத்தில் சேமிக்கப்பட வேண்டும், மேலும் மீண்டும் மீண்டும் உறைதல் மற்றும் கரைதல் தவிர்க்கப்பட வேண்டும்.ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கும் செயல்பாட்டில் RNase/DNase இலவச குறிப்புகள், மையவிலக்கு குழாய்கள் மற்றும் பிற பொருட்கள் பயன்படுத்தப்பட வேண்டும்.பிரித்தெடுத்தல் செயல்முறை முடிந்தவரை வேகமாக இருக்க வேண்டும்.பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏ ஐஸ் பெட்டியில் வைக்கப்பட்டு, சரியான நேரத்தில் -80 இல் சேமிக்கப்பட வேண்டும்.பிரித்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்என்ஏவை ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் கண்டறிய வேண்டும் என்றால், பிரித்தெடுத்த உடனேயே எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் செய்யப்பட வேண்டும், மேலும் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் பஃபர் புதிதாக தயாரிக்கப்பட்ட ஒன்றை மாற்ற வேண்டும்.
 
4. உப்பு மற்றும் கரிம கரைப்பான் எச்சங்கள்
பிரித்தெடுக்கும் உதிரிபாகங்களில் பீனால் மற்றும் குவானிடைன் உப்புகள் உள்ளன, மேலும் கழுவும் கரைசலில் எத்தனால் உள்ளது.பிரித்தெடுத்தல் செயல்பாட்டின் போது, ​​லைசேட் முழுமையாக உறிஞ்சப்பட்டு நிராகரிக்கப்படவில்லை, மேலும் சலவை தீர்வு முழுமையாக உலரவில்லை.மீதமுள்ள உப்புகள் மற்றும் கரிம கரைப்பான்கள் அடுத்தடுத்த தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் மற்றும் PCR க்கு தீங்கு விளைவிக்கும்.தடுப்பு பல்வேறு டிகிரி, எனவே திசு லைசேட் பிரித்தெடுத்தல் செயல்பாட்டின் போது முழுமையாக அகற்றப்பட வேண்டும், மற்றும் சலவை போதுமானதாக இருக்க வேண்டும், இதனால் குழாயின் சுற்றியுள்ள சுவர்கள் கழுவப்படலாம்.கூடுதலாக, குழாய் காலியானது மற்றும் ஊதப்படுவது அவசியமான நடவடிக்கையாகும், இது கரிமப் பொருட்களின் எச்சத்தை மேலும் குறைக்கும்.
 
ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுத்தல் பற்றிய கூடுதல் தகவலுக்கு, எங்கள் வலைத்தளத்தைப் பின்தொடரவும்:
மேலும் தகவலுக்கு www.foreivd.com.

7

இடுகை நேரம்: டிசம்பர்-01-2022