• முகநூல்
  • இணைக்கப்பட்ட
  • வலைஒளி

நேரடி பிசிஆர் என்பது நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கப்படாமல் பெருக்க விலங்கு அல்லது தாவர திசுக்களை நேரடியாகப் பயன்படுத்தும் ஒரு எதிர்வினை ஆகும்.பல வழிகளில், நேரடி PCR வழக்கமான PCR போலவே செயல்படுகிறது

முக்கிய வேறுபாடு நேரடி பிசிஆரில் பயன்படுத்தப்படும் தனிப்பயன் இடையகமாகும், மாதிரியானது நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுக்கப்படாமல் நேரடியாக பிசிஆர் எதிர்வினைக்கு உட்படுத்தப்படலாம், ஆனால் என்சைம்களின் சகிப்புத்தன்மை மற்றும் நேரடி பிசிஆர் வினையில் ஈடுபடும் இடையகத்தின் இணக்கத்தன்மை ஆகியவற்றிற்கான தேவைகள் உள்ளன.

பொதுவான மாதிரிகளில் அதிகமாகவோ அல்லது குறைவாகவோ PCR தடுப்பான்கள் இருந்தாலும், என்சைம்கள் மற்றும் பஃபர்களின் செயல்பாட்டின் கீழ் நேரடி PCR இன்னும் நம்பகமான பெருக்கத்தை அடைய முடியும்.பாரம்பரிய PCR எதிர்வினைக்கு உயர்தர நியூக்ளிக் அமிலம் ஒரு டெம்ப்ளேட்டாக தேவைப்படுகிறது, இது வார்ப்புருவில் புரதங்கள் மற்றும் பிற அசுத்தங்கள் இருந்தால் PCR எதிர்வினையின் சீரான முன்னேற்றத்தைத் தடுக்கலாம்.நேரடி PCR தற்போது மூலக்கூறு கண்டறிதல் துறையில் மிகவும் பிரபலமான தொழில்நுட்பங்களில் ஒன்றாகும்.

01 நேரடி PCR முதலில் விலங்கு மற்றும் தாவரங்களுக்கு பயன்படுத்தப்பட்டது

நேரடி PCR இன் ஆரம்பகால பயன்பாடு விலங்குகள் மற்றும் தாவரங்களின் துறையில் உள்ளது, இரத்தம், திசு மற்றும் எலி, பூனை, கோழி, முயல், செம்மறி, மாடு, முதலியன, தாவர இலைகள் மற்றும் விதைகள், முதலியன

இந்த புலங்கள் சில பொதுவான அம்சங்களைக் கொண்டுள்ளன, அதாவது இலக்கு மரபணு உள்ளடக்கம் ஒப்பீட்டளவில் அதிகமாக உள்ளது மற்றும் நியூக்ளிக் அமிலம் பிரித்தெடுத்தல் தொந்தரவாக உள்ளது, எனவே நேரடி PCR நேரத்தை மிச்சப்படுத்துவது மற்றும் முடிவுகளில் சிறிய தாக்கத்தை ஏற்படுத்துவது மட்டுமல்லாமல், செலவையும் மிச்சப்படுத்துகிறது.

நோய்க்கிருமிகளைக் கண்டறிவதற்காகப் பயன்படுத்தப்படும் நேரடி PCR என்பது சமீபத்திய ஆண்டுகளில் ஒரு விஷயம், சில PCR ரீஜென்ட் உற்பத்தியாளர்கள் புதுமைகளைச் செய்யும்போது இந்த திசையில் நிறைய முயற்சிகளை மேற்கொண்டுள்ளனர்.குறிப்பாக இந்த COVID-19 தொற்றுநோய்களில், SARS-CoV-2 நியூக்ளிக் அமிலம் கண்டறிதல் கிட் (மல்டிபிளக்ஸ் PCR ஃப்ளோரசன்ட் ப்ரோப் முறை) போன்ற பல கண்டறிதல் தயாரிப்புகள் சந்தையில் தோன்றியுள்ளன, இது Foregene ஆல் ஆராய்ந்து உருவாக்கப்பட்டது, இது நிகழ்நேர RT PCR தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்துகிறது. அல்லது ஓரோபார்னீஜியல் ஸ்வாப் மாதிரிகள்.

ஃபோர்ஜீன் என்பது சாதாரண ORF1ab, N, E மற்றும்மாறுபாடு SARS-CoV-2 B.1.1.7 பரம்பரை (UK), B.1.351 பரம்பரை (ZA), B.1.617 பரம்பரை (IND) மற்றும் P.1 பரம்பரை (BR) போன்ற மனித நாசோபார்னீஜியல் அல்லது ஓரோபார்னீஜியல் ஸ்வாப் மாதிரிகளில் உள்ள நியூக்ளிக் அமிலங்கள்.

02  நேரடி PCRக்கு தேவையான எதிர்வினைகள்

மாதிரி லைசேட்

மாதிரி லைசேட்டை நீங்களே கட்டமைக்கலாம் அல்லது வாங்கலாம்.லைசேட்டின் வெவ்வேறு பிராண்டுகளின் கலவையில் உள்ள வேறுபாடு லைசிங் திறனை வேறுபடுத்தும், பின்னர் லைசிங் நேரம் சற்று வித்தியாசமாக இருக்கும்.எடுத்துக்காட்டாக, விலங்கு திசு மாதிரிகள் தயாரிப்பதற்கு, 30 நிமிடங்கள் அல்லது ஒரே இரவில் சிதைவு பொதுவாக பரிந்துரைக்கப்படுகிறது, மேலும் வைரஸ்களுக்கான சிதைவு தீர்வு 3-10 நிமிடங்கள் வரை இருக்கும்.

பிசிஆர் மாஸ்டர் கலவை

குறிப்பிட்ட பெருக்கத்தை மேம்படுத்தவும், பெருக்க திறனை அதிகரிக்கவும் ஹாட்-ஸ்டார்ட் டிஎன்ஏ பாலிமரேஸைப் பயன்படுத்த பரிந்துரைக்கப்படுகிறது.நேரடி PCR இன் மையமானது மிகவும் தாங்கக்கூடிய பாலிமரேஸ் ஆகும்.

டிஎன்ஏ பெருக்கத்தை பாதிக்கும் மாதிரியில் உள்ள கூறுகளை அகற்றவும் அல்லது தடுக்கவும்

மாதிரியை லைசேட் மூலம் செயலாக்கிய பிறகு, புரதங்கள், லிப்பிடுகள் மற்றும் பிற செல் குப்பைகள் வெளியிடப்படும், இந்த பொருட்கள் PCR எதிர்வினையைத் தடுக்கும்.எனவே, இந்த காரணிகளின் செல்வாக்கைக் குறைக்க, நேரடி PCR க்கு தொடர்புடைய நீக்கம் அல்லது தடுப்பான்களைச் சேர்க்க வேண்டும்.

03  நேரடி PCR இன் ஐந்து அறிவுப் புள்ளிகளின் தொகுப்பு

முதலாவதாக, நேரடி PCR தொழில்நுட்பம் என்பது பல்வேறு உயிரியல் மாதிரிகளுக்கான நேரடி PCR தொழில்நுட்பமாகும்.இந்த தொழில்நுட்ப நிபந்தனையின் கீழ், நியூக்ளிக் அமிலத்தைப் பிரித்து பிரித்தெடுக்க வேண்டிய அவசியம் இல்லை, நேரடியாக திசு மாதிரியை பொருளாகப் பயன்படுத்தவும், மேலும் PCR எதிர்வினையைச் செய்ய இலக்கு மரபணு ப்ரைமர்களைச் சேர்க்கவும்.

இரண்டாவதாக, நேரடி PCR தொழில்நுட்பம் என்பது ஒரு பாரம்பரிய டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட் பெருக்க தொழில்நுட்பம் மட்டுமல்ல, ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட் ரிவர்ஸ் டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன் பிசிஆர் அடங்கும்.

மூன்றாவதாக, நேரடி PCR தொழில்நுட்பமானது திசு மாதிரிகளில் வழக்கமான தரமான PCR எதிர்வினைகளை நேரடியாகச் செய்வது மட்டுமல்லாமல், நிகழ்நேர qPCR எதிர்வினைகளையும் உள்ளடக்கியது, இதற்கு எதிர்வினை அமைப்பு வலுவான பின்னணி எதிர்ப்பு ஃப்ளோரசன்ஸ் குறுக்கீடு திறனைக் கொண்டிருக்க வேண்டும் மற்றும் எண்டோஜெனஸ் ஃப்ளோரசன்ஸ் எதிரிடையான திறனைத் தணிக்கிறது.

நான்காவதாக, நேரடி PCR தொழில்நுட்பத்தால் குறிவைக்கப்பட்ட மாதிரிகளுக்கு நியூக்ளிக் அமில வார்ப்புருக்கள் மட்டுமே தேவைப்படுகிறது, மேலும் PCR எதிர்வினைக்கு இடையூறு விளைவிக்கும் புரதங்கள், பாலிசாக்கரைடுகள், உப்பு அயனிகள் போன்றவற்றை அகற்ற வேண்டாம்.சிக்கலான நிலைமைகளின் கீழ் நொதிகளின் செயல்பாடு மற்றும் நகலெடுக்கும் துல்லியத்தை உறுதிசெய்ய சிறந்த எதிர்ப்பு மற்றும் தகவமைப்புத் தன்மையைக் கொண்டிருப்பதற்கு எதிர்வினை அமைப்பில் உள்ள நியூக்ளிக் அமில பாலிமரேஸ் மற்றும் PCR கலவை தேவைப்படுகிறது.

ஐந்தாவது, எந்த நியூக்ளிக் அமிலம் செறிவூட்டல் சிகிச்சை மற்றும் டெம்ப்ளேட் அளவு இல்லாமல் நேரடி PCR தொழில்நுட்பம் இலக்காக திசு மாதிரி மிகவும் சிறியதாக உள்ளது, எதிர்வினை அமைப்பு மிகவும் அதிக உணர்திறன் மற்றும் பெருக்க திறன் வேண்டும்.


இடுகை நேரம்: ஜூன்-28-2021