PCR எதிர்வினைகளைச் செய்யும்போது எல்லோரும் எப்போதும் இதுபோன்ற அல்லது இதுபோன்ற சிக்கல்களைச் சந்திப்பார்கள் என்று நான் நம்புகிறேன், ஆனால் அவற்றில் பெரும்பாலானவை இரண்டு முக்கிய சிக்கல்களாக வகைப்படுத்தலாம்:

மரபணு வார்ப்புருவின் மிகக் குறைந்த பெருக்கம் (பெருக்கம்);
அதிக இலக்கு அல்லாத மரபணு பெருக்கம்.
இந்தச் சிக்கல்களைத் தீர்ப்பதற்கான பொதுவான உத்திகளில் ஒன்று சேர்க்கைகளைப் பயன்படுத்துவது.பொதுவாக சேர்க்கைகளின் பங்கு இரண்டு அம்சங்களைக் கொண்டுள்ளது:
இரண்டாம் நிலை அமைப்புமரபணுக்களின் (இரண்டாம் நிலை அமைப்பு);
குறிப்பிடப்படாத ப்ரைமிங்கைக் குறைக்கவும்.
இன்று, PCR எதிர்வினைகளில் உள்ள பொதுவான சேர்க்கைகள் மற்றும் அவற்றின் செயல்பாடுகளை ஆசிரியர் சுருக்கமாக உங்களுக்கு அறிமுகப்படுத்துவார்.
இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்பைக் குறைக்கும் சேர்க்கைகள்
சல்பாக்சைடு(DMSO)
மரபணு மாதிரிகள்உயர் GC உள்ளடக்கத்துடன்.இருப்பினும், டிஎம்எஸ்ஓ டாக் பாலிமரேஸ் செயல்பாட்டையும் வெகுவாகக் குறைக்கிறது.எனவே, ஒவ்வொருவரும் வார்ப்புரு அணுகல் மற்றும் பாலிமரேஸின் செயல்பாட்டை சமநிலைப்படுத்த வேண்டும்.உங்கள் பரிசோதனைக்கு ஏற்ற செறிவைக் கண்டறிய, 2% முதல் 10% வரை, DSMO இன் வெவ்வேறு செறிவுகளை நீங்கள் முயற்சி செய்யலாம் என்று ஆசிரியர் பரிந்துரைக்கிறார்.
அயனி அல்லாத சவர்க்காரம்
0.1-1% ட்ரைடன் X-100, ட்வீன் 20 அல்லது NP-40 போன்ற அயனி அல்லாத சவர்க்காரம் பொதுவாக டிஎன்ஏ இரண்டாம் நிலை அமைப்பைக் குறைக்கிறது.இது டெம்ப்ளேட் மரபணுவின் பெருக்கத்தை அதிகரிக்கலாம் என்றாலும், இது குறிப்பிட்ட அல்லாத பெருக்கத்தின் சிக்கலையும் ஏற்படுத்தும்.எனவே, இந்த சேர்க்கைகள் குப்பைகள் இல்லாமல் குறைந்த மகசூல் PCR எதிர்வினைகளுக்கு நன்றாக வேலை செய்கின்றன, ஆனால் ஒப்பீட்டளவில் தூய்மையற்ற PRC எதிர்வினைகளுக்கு நன்றாக இல்லை.அயனி அல்லாத சவர்க்காரங்களின் மற்றொரு நன்மை SDS மாசுபாட்டைக் குறைப்பதாகும்.பொதுவாக டிஎன்ஏ பிரித்தெடுக்கும் செயல்பாட்டின் போது, ​​எஸ்டிஎஸ் பிசிஆர் படிக்கு கொண்டு வரப்படும், இது பாலிமரேஸின் செயல்பாட்டை பெரிதும் தடுக்கிறது.எனவே, எதிர்வினைக்கு 0.5% Tween-20 அல்லது Tween-40 ஐ சேர்ப்பது SDS இன் எதிர்மறை விளைவுகளை நடுநிலையாக்குகிறது.
பீடைன்_
பீடைன் இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்பை உருவாக்குவதைக் குறைப்பதன் மூலம் டிஎன்ஏ பெருக்கத்தை மேம்படுத்தலாம் மற்றும் பொதுவாக வணிக பிசிஆர் கருவிகளுக்கு ஒரு "மர்மம்" கூடுதலாகும்.நீங்கள் பீடைனைப் பயன்படுத்த விரும்பினால், நீங்கள் பீடைன் அல்லது பீடைன் மோனோ-ஹைட்ரேட் (பீடைன் அல்லது பீடைன் மோனோ-ஹைட்ரேட்) போட வேண்டும், ஆனால் பீடைன் ஹைட்ரோகுளோரைடு (பீடைன் எச்.சி.எல்) அல்ல, இறுதி செறிவு 1-1.7M வரை சரிசெய்யவும்.டிஎன்ஏ உருகும்/டிஎன்ஏ டினாட்டரேஷனின் அடிப்படை ஜோடி கலவை சார்ந்திருப்பதை நீக்குவதால், குறிப்பிட்ட தன்மையை மேம்படுத்தவும் பீடைன் உதவும்.
குறிப்பிடப்படாத ப்ரைமிங்கைக் குறைப்பதற்கான சேர்க்கைகள்
ஃபார்மமைடு
ஃபார்மமைடு என்பது பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் ஆர்கானிக் பிசிஆர் சேர்க்கையாகும்.இது டிஎன்ஏவில் உள்ள பெரிய பள்ளம் மற்றும் சிறிய பள்ளத்துடன் இணைந்து, அதன் மூலம் மாஸ்டர் டிஎன்ஏ டபுள் ஹெலிக்ஸின் நிலைத்தன்மையைக் குறைக்கிறது மற்றும் டிஎன்ஏவின் உருகும் வெப்பநிலையைக் குறைக்கிறது.PCR சோதனைகளில் பயன்படுத்தப்படும் ஃபார்மைமைட்டின் செறிவு பொதுவாக 1%-5% ஆகும்.
டெட்ராமெதில்அம்மோனியம் குளோரைடு( TMAC)
டெட்ராமெதிலாமோனியம் குளோரைடு கலப்பினத்தின் தனித்தன்மையை (ஹைப்ரிடைசேஷன் விவரக்குறிப்பு) அதிகரிக்கலாம் மற்றும் டிஎன்ஏவின் உருகும் வெப்பநிலையை அதிகரிக்கலாம்.இவ்வாறு, TMAC ஆனது குறிப்பிட்ட அல்லாத ப்ரைமிங்கை நீக்கி டிஎன்ஏ மற்றும் ஆர்என்ஏவின் தவறான பிணைப்பைக் குறைக்கும்.நீங்கள் பயன்படுத்தினால்சீரழிந்த ப்ரைமர்கள்PCR எதிர்வினையில், TMAC ஐச் சேர்க்க நினைவில் கொள்ளுங்கள், இது பொதுவாக 15-100mM செறிவில் பயன்படுத்தப்படுகிறது.
பிற பொதுவான சேர்க்கைகள்
மேலே குறிப்பிடப்பட்ட இரண்டு வகை சேர்க்கைகளுக்கு கூடுதலாக, PCR எதிர்வினைகளில் பல பொதுவான சேர்க்கைகள் உள்ளன, அவை வெவ்வேறு செயல்பாடுகளைக் கொண்டிருந்தாலும், அவை மிகவும் முக்கியமானவை.
மக்னீசியம் அயன்
மெக்னீசியம் அயனி என்பது பாலிமரேஸின் இன்றியமையாத காஃபாக்டர் (கோஃபாக்டர்) ஆகும், அதாவது, மெக்னீசியம் அயனி இல்லாமல், பாலிமரேஸ் செயலற்றது.இருப்பினும், அதிகப்படியான மெக்னீசியம் அயனிகள் பாலிமரேஸின் செயல்திறனையும் பாதிக்கலாம்.ஒவ்வொரு PCR எதிர்வினையிலும் மெக்னீசியம் அயனிகளின் செறிவு மாறுபடும்.செலேட்டிங் முகவர்கள் (ஈடிடிஏ அல்லது சிட்ரேட் போன்றவை), டிஎன்டிபி மற்றும் புரதங்களின் செறிவு அனைத்தும் மெக்னீசியம் அயனிகளின் செறிவை பாதிக்கிறது.எனவே, உங்கள் PCR பரிசோதனையில் சிக்கல்கள் இருந்தால், வெவ்வேறு மெக்னீசியம் அயன் செறிவுகளை மாற்ற முயற்சி செய்யலாம், உதாரணமாக, 1.0 முதல் 4.0mM வரை, இடையில் 0.5-1mM இடைவெளியுடன்.
பல உறைதல்-கரை சுழற்சிகள் மெக்னீசியம் குளோரைடு கரைசலின் செறிவு அடுக்கிற்கு வழிவகுக்கும் என்பது கவனிக்கத்தக்கது.எனவே, ஒவ்வொரு பயன்பாட்டிற்கும் முன்பு நீங்கள் அதை முழுமையாகக் கரைக்க வேண்டும், மேலும் அதைப் பயன்படுத்துவதற்கு முன்பு அதை நன்கு கலக்கவும்.
போவின் சீரம் அல்புமின்(போவின் அல்புமின், பிஎஸ்ஏ)
மூலக்கூறு வேதியியல் சோதனைகளில், போவின் சீரம் அல்புமின் மிகவும் பொதுவான சேர்க்கையாகும், குறிப்பாக கட்டுப்பாட்டு நொதி செரிமானம் மற்றும் PCR சோதனைகளில்.பிசிஆர் எதிர்வினைகளில், பினாலிக் கலவைகள் போன்ற அசுத்தங்களைக் குறைப்பதில் பிஎஸ்ஏ உதவியாக இருக்கும்.மேலும் இது சோதனைக் குழாயின் சுவரில் உள்ள எதிர்வினைகளின் ஒட்டுதலைக் குறைக்கும் என்றும் கூறப்படுகிறது.PCR எதிர்வினையில், பொதுவாக சேர்க்கப்பட்ட BSA இன் செறிவு 0.8 mg/ml ஐ எட்டும்.
 
தொடர்புடைய தயாரிப்புகள்:
பிசிஆர் ஹீரோ(சாயத்துடன்)
பிசிஆர் ஹீரோ